--- title: 八连管原位冻干试剂生产备货流程 scene: 诊断原料线 · 冻干试剂生产备货（八连管原位冻干为主，含冻干球路线） line: da owner: 待指派（生产部 / STC） updated: 2026-10-08 confidence: 高（逐字转录自内部 SOP 原件，未增补推断内容） source: 20260929-STC-八连管原位冻干试剂生产备货流程.docx --- # 八连管原位冻干试剂生产备货流程 > 内部生产 SOP ｜ 原件日期 2026-09-29 ｜ 转录整理 2026-10-08 > 原件内含流程图与《配制记录》表单照片，均以图片形式存在；本文末附文字化版本。 --- ## 4. 定义 **4.1** 八连管原位冻干是指将试剂分液至八连管中进行冻干。 --- ## 5. 工作程序 ### 5.1 仪器 | 仪器 | 型号 | 厂家 | |---|---|---| | 分析电子天平 | / | / | | 标准混匀仪 | / | / | | 低速台式离心机 | / | / | | 八联管离心机 | / | / | | 冷冻干燥机 | / | / | | 除湿机 | / | / | | 真空包装机 | / | / | > 表中型号与厂家原件均为「/」，即未指定具体设备。 ### 5.2 操作步骤 #### 5.2.1 来料阴性检：根据客户需求进行来料检测（NA 系列） **5.2.1.1 检测方法** 来料试剂种类主要为客户引物、探针、染料，引物与探针需分开配制阴性反应体系。将配制好的阴性反应体系分装至八联管中，20μl/T，8T。每个实验加入一个阳性孔（1.56μl 客户 pbmix + 5μl 客户模板），上机检测（PCR 完成）。 **5.2.1.2 检测结果判断** - 若阴性孔出现**特异性扩增**，则**退回试剂**，客户需重新准备引物探针原料。 - 若阴性孔**无特异性扩增**，则可用于后续冻干试剂生产。 #### 5.2.2 按照客户标准进行来料功能检 冻干生产前，检测试剂扩增是否正常。来料功能检需客户提供： - 引探配制说明、模板使用说明 - 客户前期测试液体试剂扩增性能报告（供宝锐参考） 液体试剂按下表进行配制，配制完成后需**混匀离心后上机检测**；扩增试剂以及引物探针需**交叉检**，分为 4 组进行检测（见下表），**来料检合格后方可进行后续步骤**。 **4 组交叉检设计** | 分组 | 组成 | |---|---| | 第 1 组 | 扩增试剂（标准品）+ 冻干保护剂（标准品）+ 引探小样预混液（标准品） | | 第 2 组 | 扩增试剂（标准品）+ 冻干保护剂（标准品）+ 引探小样预混液（**待检品**） | | 第 3 组 | 扩增试剂（**待检品**）+ 冻干保护剂（**待检品**）+ 引探小样预混液（标准品） | | 第 4 组 | 扩增试剂（**待检品**）+ 冻干保护剂（**待检品**）+ 引探小样预混液（**待检品**） | > **原件说明**：由于无引探标准品（旧批次引探），且扩增试剂和保护剂已经指定（标准品），**实际测试为第 1 组**。 #### 5.2.3 冻干上机步骤 **5.2.3.1** 根据《××冻干试剂配制表》从仓库领取相关物料，并核对物料名称、数量是否与配制表一致。 **5.2.3.2** 物料 4℃ 化冻。提前将原料取出，放 4℃ 化冻后，颠倒混匀 10min。混匀结束后，2–8℃ 或适宜温度静置 10min。 - **关键控制点**：以液体整体缓慢翻转为宜，**不形成明显漩涡**。 - 若液体表面仍存在明显气泡，则低速离心 3000 rpm 离心 1min。 **5.2.3.3** 称量法完成液体试剂配制，配制时参考《液体试剂配制操作规范》。（若含客户引探的定制产品，第一步先加客户引探，客户引探按配制表所示体积加入） - 附「配制表示例」（见本文末「配制记录/配制表示例」）。 **5.2.3.4** 配制后，颠倒混匀 10min。混匀结束后，2–8℃ 或适宜温度静置 10min。 - **关键控制点**：以液体整体缓慢翻转为宜，不形成明显漩涡。观察液面无连续泡沫层、大量细小气泡。 - **检查项**：无明显泡沫层；无大量微气泡；无絮状物；无分层；无析出。 - 满足以上条件就直接进入下一步，**不离心**；若有挂壁进行低速离心 3000 rpm 离心 1min（**若含引物、探针，则需在瓶身外包裹一层铝箔纸**）。 **5.2.3.5** 冻干机检查：检查冻干机真空泵油是否澄清、冷阱有无多余残留水分，侧边放水阀、进气阀是否紧闭。 **5.2.3.6** 冻干机开机：根据《××冻干试剂配制表》设置冻干程序并保存，在「设备操作」页面依次打开「压缩机」「搁板控温」「真空计」，启动冻干机。 **5.2.3.7** 离心后的试剂进行分装，分装过程中避免长时间停顿。 **5.2.3.8** 若进行八联管原位冻干，则按照《××冻干试剂配制表》所示每孔加样量将试剂分液至八联管中，离心后检查八联管侧壁有无样品挂壁，若有样品挂壁，则需再次瞬离。 **5.2.3.9** 将八联管样品转移至冻干机内，关紧冻干机舱门，并填写《冻干机仪器使用表》《冻干生产记录表》。 **5.2.3.10** 冻干机启动 30min 后，低温压缩机启动，需再次确认冻干程序是否与配制表一致，在「设备操作」页面，开启「自动控制」。 **5.2.3.11** 在一次升华运行开始阶段，进行冻干机巡检，并填写《冻干机巡检记录》。点击冻干机「设备状态」，观察搁板温度及真空度是否与设定一致；点击「设备操作」，确认「压缩机」「搁板控温」「冷阱制冷」「真空计」是否开启。 **5.2.3.12** 冻干程序运行结束前 30min，打开除湿机，湿度设置为「10%」，使环境湿度降低至 20% 以下，温度控制 30℃ 以下；提前准备好包装用内外包材，放置于低湿环境中。（如若使用西林瓶分装需提前用烘箱 120℃ 烘 1H 以上） **5.2.3.13** 冻干程序运行结束后，在「设备操作」界面点击「手动操作」后依次关闭「真空泵」「压缩机」「搁板控温」「冷阱制冷」；半压塞样品需箱内压塞后，再点击「进气阀」，并旋松真空微调阀，等冻干舱内外压强一致后打开舱门，取出样品。 **5.2.3.14** 逐个检查冻干样品形态是否正常。 **5.2.3.15** 目检合格的冻干样品进行真空密封包装（**真空包装机参数：抽气 25 秒，热封 2 秒，冷却 3 秒**）；取 **9T** 冻干样品进行扩增功能检；取最后完成密封包装的 **8–10T** 冻干样品测样品含水量，**样品含水量需小于 3.5%**。 **5.2.3.16** 填写《冻干机使用记录》《冻干生产记录》，其中《冻干生产记录表》中需填写：下机时间、下机湿度、盖盖时长、热封包装时长、下机数量。 **5.2.3.17** 拷贝本次冻干机运行数据并做记录保存、分析。 ### 5.2.4 注（多产品同机与包装/时限要求） - 若一台冻干机中冻干多个产品，冻干上机时应**使用标签区分不同产品**。 - 下机盖盖后先将不同项目冻干样品进行分类（此过程需要**一人分类、另一人核对**分类是否正确），再装至对应自封铝箔袋中。 - 产品按序进行真空包装，真空包装过程中包装好的冻干样品装至相应透明自封袋中。 - 按产品顺序，在铝箔袋包装上贴产品标签，**每处理完一个品种，进行一次清场**，避免混淆。 - 操作完成后，需确认：透明自封袋封口是否封紧；自封铝箔袋、桌面、搁板、真空包装机中是否有样品遗漏。 - **时限要求（八联管冻干样品）**： - 小于 **3500T**：从下机到样品盖盖时间 **< 20min**；盖盖后抽真空包装时间控制在 **1h 以内**。 - **3500T–20000T**：从下机到所有样品盖盖完成时间 **< 1h**；盖盖后抽真空包装时间控制在 **3h 以内**。 --- ## 6. 流程图（原件为图片，以下为文字化） ``` 冻干工艺已经在宝锐适配验证完成 ↓ 冻干生产需求 ↓ ◇ 确认是否含客户引探冻干 ├─ 是 → 客户来料签收登记 │ ↓ │ ◇ 按照客户标准进行来料功能检 │ ├─ 合格 → 准备冻干物料 │ └─ 不合格 → 退回试剂 └─ 否 → 准备冻干物料 ↓ 配制冻干反应体系 ↓ 混匀、离心 ↓ ◇ 确认冻干形式 ├─ 八连管冻干 → 分装试剂到八连管中 → 八连管离心 └─ 冻干球冻干 → 使用滴球机滴球形成球 → 分装球到西林瓶或培养皿或托盘中 〔侧注〕西林瓶：常规分装 10T/瓶；培养皿：常规分装 50T/皿； 冻干球数量较多时采用，如 1000T 及以上 ↓ 上冻干机冻干 ↓ 抽真空巡检 ↓ 提前 1h 打开除湿机除湿 ┈┈→ 湿度降到 25% 以下 ↓ ◇ 出箱目检冻干样品 ├─ 形态异常 → 不合格品处理 └─ 形态正常 → 包装 ──→〔侧注〕留样进行长期稳定性评价 ↓ ◇ 冻干样品功能性检 ├─ 不合格 → 不合格品处理 └─ 合格 ↓ 含水量测定 ├─ 不合格 → 不合格品处理 └─ 合格 ↓ 发货 ``` --- ## 7. 配制记录 / 配制表示例（原件为表单照片，以下为识读） **表单编号示例**：`PFM5181-4-028302-O20-NA 配置记录` | 表头项 | 值（示例） | 表头项 | 值（示例） | |---|---|---|---| | 批量（20μl 体系） | 0.0150 万人份 / 2.25 ml | 配制批号 | 20260917 | | 何种类型 | ☑ 研发　☐ 生产 | 出箱批号 | 20260918 | | 是否留样 | ☐ 是　☑ 否 | 出箱温度 | 75℃ | | 是否入库 | ☐ 是　☑ 否 | 出箱湿度 | 20% | | 是否合格 | ☐ 是　☐ 否 | 配制人 / 复核人 | （签名，原件已做遮挡） | **配制表** | 名称 | 批号 | V/T 20μL | 参考体积 /ml | 密度 (g/ml) | 参考称量量 (g) | 实际称量量 (g) | |---|---|---|---|---|---|---| | 5-FastAmpli Premix Buffer IV (dUTP)(DG)(028302) | 20260326 | 4 | 0.600 | — | — | — | | 50-FastAmpli Enzyme/UNG Mix IV (DG) | 20260326 | 0.6 | 0.090 | — | — | — | | 4 冻干保护剂-9（NA） | 20260428 | 5 | 0.750 | — | — | — | | SPRD 染料 | — | 1 | 0.150 | — | — | 0.150 | | ddH₂O | — | 4.4 | 0.660 | 1.000 | 0.660 | 0.661 | | **Total** | | **15** | **2.250** | | | | - **总体积 (ml)**：2.25 - **瓶身重量** 0.072 ｜ **瓶盖重量** 1 ｜ **总重** 6.428 - **备注**：原件手写为「冻溶分装」（字迹辨认存疑，使用前请核对原件）。 --- ## ⚠️ 待确认（原文前后不一致，照实标注） **除湿时机与湿度阈值**，正文与流程图不一致： | 出处 | 时机 | 设定 | 目标 | |---|---|---|---| | 正文 5.2.3.12 | 冻干程序运行**结束前 30min** | 湿度设置「10%」 | 环境湿度降至 **20% 以下**，温度 30℃ 以下 | | 流程图 | **提前 1h** 打开除湿机除湿 | — | 湿度降到 **25% 以下** | > 两者不是同一口径（时机 30min vs 1h；目标 20% vs 25%）。**本文照实并列，未擅自统一** —— 请生产部确认以哪一处为准后再用于执行。 **原件笔误**：离心转速原件写作「3000prm」（出现 2 处，5.2.3.2 与 5.2.3.4），应为 `rpm`。本文正文按 `3000 rpm` 呈现，此处照实记录，未改动原件表述。 --- ## 附：原件与图片 | 内容 | 载体 | |---|---| | 完整 SOP 原件 | `20260929-STC-八连管原位冻干试剂生产备货流程.docx` | | 流程图 | 原件内嵌图（`image2.png`，753×1697） | | 配制记录表单（含手写填写） | 原件内嵌图（`image1.jpeg`，65955 B） | > 两张图片带「试用文档」类水印，且配制记录照片含批号与手写签名（签名处已做遮挡）。原件属内部生产资料，仅在本受限知识库内使用。