适配体修饰 Tth 酶的热激活条件
—— 与罗氏 Cobas / Z05 体系的差异对照

证据口径：宝锐侧 = 官方产品 PPT 转写 + ERP/货号主数据 + 客户活动记录（一手，本地留档）；罗氏侧 = Roche Custom Biotech 官方产品册与 Data Sheet + Cobas 标准程序文献复现（一手）。凡标注待确认者为本机无直接文字证据、须向产品部核实的项。

一、决策总览

适配体（可逆）

热启动机制：两侧同源

宝锐 Hyperstart® 与罗氏 Z05/AptaTaq 均为 aptamer 分子开关

60 ℃ 以上释放

释放阈值：几乎一致

宝锐写「60 ℃ 以上可逆」；罗氏写「<55 ℃ 抑制 / >60 ℃ 完全释放」

30 s vs 5 s

程序中的激活步骤

宝锐留 90–95 ℃ 30 s；Cobas 仅 94–95 ℃ 5 s（化学法需 5–15 min）

原料 vs 平台

不可直接比的部分

宝锐交付裸酶/预混液由客户自建体系；Cobas 是仪器+试剂+内标封闭平台

二、热启动机制与释放阈值

适配体是一段单链寡核苷酸，靠三级结构结合并封闭聚合酶活性位点。它的结合是温度依赖且可逆的——降温重新结合、升温再次释放，因此不需要化学修饰酶那种不可逆的长时间高温激活。

结论：宝锐「60 ℃ 以上，可逆热启动」与罗氏「<55 ℃ 抑制、>60 ℃ 完全释放」描述的是同一物理机制。差异来自各家适配体序列的 Tm 不同，实际释放温度应以自家适配体的实测曲线为准。

三、程序时序对照

三套程序都以升温过 60 ℃ 完成适配体释放。宝锐在释放后保留 90–95 ℃ 30 s（兼顾 RNA 二级结构解链与释放）， Cobas 把该步骤压到 94–95 ℃ 仅 5 s——因为适配体法不需要长激活，这也是其官方口径「PCR 热启动激活时间 0 min」的由来。

柱长按「各段时长合计」绘制；标称总时长更长，差值为升降温与荧光采集开销。

四、宝锐侧：Hyperstart® Tth

4.1 机制与产品

宝锐官方产品表原文：2×Hyperstart® Direct Premix-UNG (Probe qPCR)（MD2021）：①适配体修饰的抗抑制 DNA 聚合酶，60 ℃ 以上，可逆热启动 → Hyperstart® 品牌 = 适配体修饰的可逆热启动，Tth 线即 Hyperstart Tth（E10 系列）。

形态	货号	说明
裸酶	`E10` · `E10-000725` · `E10-019505` · `E10-019510` · `E10-AT1` · `E10-AT5` · `E10-NA`	6 位尾缀为配方版本号；`-NA` 为控核酸版
冻干定制	`FE10` 系列（DG）	原位冻干形态
预混液	`FM510` · `FM5101` · `M5101` · `M2101-DB` · `M510-DB` · `M510-TP` · `2FM101-1`	含 UNG 版本齐备

4.2 官方推荐程序（E10-000725 · qRT 4-2 体系 · 仪器 48S）

程序	步骤	全程
常规	50 ℃ 2 min → 90 ℃ 30 s → 60 ℃ 20 min → 95 ℃ 30 s → 45×(95 ℃ 10 s, 56 ℃ 30 s)	1 h 20 min
快速	50 ℃ 2 min → 90 ℃ 30 s → 60 ℃ 5 min → 95 ℃ 30 s → 45×(95 ℃ 1 s, 60 ℃ 5 s)	29 min
DNA 体系	50 ℃ 2 min → 95 ℃ 30 s → 50×(95 ℃ 5 s, 55 ℃ 30 s)	（仪器 SLAN-96P）

直接回答「热激活条件」：适配体在 60 ℃ 以上自动释放，程序里对应 90 ℃ 或 95 ℃ 30 s 这一步，不需要化学修饰酶那样的 95 ℃ 5–15 min 长激活。

4.3 客户侧实测（活动记录）

Tth 以裸酶交付、适配体修饰由客户自行完成；镁离子型 3–4 U/反应、锰离子型 10 U/反应
POCT 客户仪器为 90 ℃ 10 min 特性，只能用 Tth 酶；现版镁离子型 Ct 表现可接受，但逆转录需 30 min，客户要求压到 ≤15 min
抗抑制实测：E10-000725 在尿素/胆酸盐/肝素钠/腐殖酸/异硫氰酸胍环境中优于 Robustart Tth

五、罗氏侧：Cobas / Z05

5.1 官方酶学参数（Z05 · HawkZ05 · AptaTaq）

项目	数值
热启动机制	适配体（Z05 聚合酶 + 特异寡核苷酸）
抑制 / 释放	<55 ℃ 被抑制；>60 ℃ 适配体完全释放
激活温度	≥ +60 ℃ 即有活性
最适温度 / 95 ℃ 半衰期	≈ +75 ℃ / ≈ 40 min
PCR 热启动激活时间	0 min（化学修饰法对照需 15 min）
外切活性	无 3'→5' 外切；有双链特异 5'→3' 外切

5.2 Cobas 6800/8800 标准循环程序

Pre-PCR  : 50℃ 2:00 → 94℃ 0:05 → 55℃ 2:00 → 60℃ 6:00 → 65℃ 4:00
第1测量  : 5×(95℃ 0:05, 55℃ 0:30)
第2测量  : 45×(91℃ 0:05, 58℃ 0:25)
冷却     : 40℃ 2:00

无 95 ℃ 长预变性；逆转录采用 55/60/65 ℃ 分段共约 12 min。

六、逐项差异

维度	宝锐 Hyperstart Tth	罗氏 Z05（Cobas）	差异性质
热启动机制	适配体（可逆）	适配体（可逆）	同源
释放阈值	60 ℃ 以上	>60 ℃ 释放 / <55 ℃ 抑制	几乎一致
程序中激活步骤	90–95 ℃ 30 s	94–95 ℃ 5 s	宝锐留余量，罗氏压到最短
酶本体	Tth（Thermus thermophilus）	Z05（Thermus sp. Z05）	实质差异
RT 活性	有；Mn²⁺ 型天然依赖 Mn²⁺（宝锐另供 Mg²⁺ 型规避）	有；最适 ≈75 ℃	Tth 需 60 ℃ 长时 RT
RT 时长	常规 60 ℃ 20 min（快速 5 min）	55/60/65 ℃ 分段共 ≈12 min	宝锐此处为客户痛点
抗抑制	E10-000725 优于 Robustart Tth	Z05 以高抗抑制著称	罗氏偏强（无同条件横比数据）
耐热	—	95 ℃ 半衰期 ≈40 min	罗氏有公开硬数据
交付形态	原料（裸酶/预混/可冻干），客户自建体系	封闭平台（仪器+试剂+内标+软件）	不可直接比
定位	POCT、呼吸道多联检、中低通量	高通量全自动（6800/8800）	—

七、结论与可执行动作

① 客户答疑话术（可直接用）
「适配体法的激活是温度开关：升温过 60 ℃ 即释放，程序里 90–95 ℃ 30 s 足够；不需要化学修饰酶的 95 ℃ 5–15 min 长激活——这正是适配体法能做快速 PCR / POCT 的原因。」

主责：技术支持；协同：销售（客户答疑）｜验收：客户复述机制无误

② 打客户 RT 时间痛点
客户要求「Tth 逆转录 ≤15 min」——现成答案是快速程序 60 ℃ 5 min、全程 29 min（官方数据）。先按 E10-000725 口径对齐，再谈版本。

主责：产品销售（出对比数据包）；协同：技术支持（实测复核）｜验收：客户按快速程序跑通并回签

③ 适配体修饰的对外措辞先锁死
对外统一说「Hyperstart® 平台 = 适配体修饰可逆热启动」，并引用 MD2021 产品行原文；涉 E10 需附产品部确认。

主责：产品部（出 E10 说明书措辞）；协同：营销中心（宣讲物料）｜验收：说明书原文回函存档

④ 竞品对照口径
与 Cobas/Z05 对比时，强调机制同源、阈值一致，差异落在酶本体与交付形态——不要把「原料」与「封闭平台」放在同一性能维度上比。

主责：营销中心（宣讲物料）；协同：市场（竞品情报）｜验收：物料合规自检通过

八、缺口与待确认

① E10 系列说明书的「适配体」措辞 待确认
本机证据：同品牌 MD2021 行明确写「适配体修饰」；E10 自家产品行未逐字写适配体。 → 影响：客户追问「哪个版本才是适配体封闭」时无官方原文可引。请产品部出具 E10 现行说明书。

② 罗氏与宝锐的同条件横比数据 缺失
抗抑制、灵敏度、Ct 表现两侧口径不同源，本页不做数值横比。如需硬对比，须做同引探同仪器的头对头实验。

③ Cobas 程序为文献复现 口径提醒
标准循环程序取自公开文献对 Cobas 6800/8800 的复现，非罗氏官方 IFU 原文；正式引用请以对应试剂 IFU 为准。

九、来源

宝锐侧（本地留档一手）：
· 官方产品 PPT 转写：资料/PPT转写/PPT2_产品分子技术版_20260826-27.md（第 39/40/45 张 + 适配体产品行）
· 货号主数据：培训与上手/刘子研上手包/数据/核酸扩增原料货号清单.json；产品总表：数据/product_master.json
· 客户实证：数据/_sr_extracted.json（镁激活 TTH 裸酶 3–4 U/反应、客户自做适配体修饰）、数据/activities_feishu.json（POCT 90 ℃ 10 min 平台、RT ≤15 min 要求）

罗氏侧：
· Roche Custom Biotech《Molecular Diagnostics – Amplification》DNA Polymerases / Hot Start 产品册（Z05 参数、HawkZ05 = Z05 + aptamer）
· HawkZ05 Fast DNA Polymerase Data Sheet（<55 ℃ 抑制 / >60 ℃ 完全释放）
· AptaTaq 产品页与家族手册（可逆分子开关、激活时间 0 min、省 15 min）
· Cobas 6800/8800 标准循环程序（公开文献复现）

学术文献：
· 10.1006/jmbi.1997.1165 J Mol Biol — 适配体同时抑制 Taq 与 Tth 聚合酶（异二聚体适配体）
· 10.2174/0929866530666230216113348 Protein Pept Lett 2023 — Tth 逆转录活性依赖 Mn²⁺，突变可解除依赖
· 10.1371/journal.pone.0345402 PLoS One 2026 — 化学修饰/适配体/抗体三类热启动对比（激活时长差异）
· 10.1039/c6cc00454g Chem Commun 2016 — 金属离子触发聚合酶可逆开关

宝锐生物 · 营销中心｜本页为内部技术精读资料，含客户项目信息，不得对外发送。

适配体修饰 Tth 酶的热激活条件—— 与罗氏 Cobas / Z05 体系的差异对照