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 "体系配置候选": [
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   "原文": "*5×First-Strand Buffer 不含dNTP，配制反应体系时请加入dNTPs 使用。"
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   "原文": "1. 参考下表进行体系配制："
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 "反应程序候选": [
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   "原文": "72℃"
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   "原文": "1. 适用于50℃~55℃范围内进行反转录温度优化。"
  }
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 "文中货号": [
  "E43"
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 "逐页文本": [
  "Neoscript RTase HS Ⅱ\n货号：E43\n2026V01\n产品概述\nNeoscript RTase HS Ⅱ是在宝锐Neoscript RTase 基础上通过理性筛选平台定向改造获得的高活性逆转录酶，具有更高的活\n性、温度耐受性以及更突出的抑制物耐受性，适用于高温反转录和快速反转录。本产品经热启动修饰封闭常温下逆转录酶活\n性，能够有效消除RNA 高级结构与非特异性因素对cDNA 合成的不利影响，具有更高的稳定性和反转录合成能力。\n规格\n200 U/µL\n试剂组成\n1．200 U/µL Neoscript RTase HS Ⅱ\n2．5×First-Strand Buffer（选配）\n*5×First-Strand Buffer 不含dNTP，配制反应体系时请加入dNTPs 使用。\n活性定义\n以poly(A)•Oligo(dT)25 为模板/引物，在37℃条件下，10 min 内掺入1 nmol 的dTTP 所需的酶量为1 个活性单位（U）。\n储存缓冲液\n20 mM Tris-HCl (pH7.5)，100 mM NaCl，0.1 mM EDTA，1 mM DTT，Stabilizer，50% Glycerol。\n保存条件\n-20±5℃存储；使用前应混匀，避免反复冻融。\n质量控制\n1. SDS-PAGE 电泳纯度大于98%。\n2. 扩增灵敏度、批间差异、稳定性。\n3. 无外源核酸酶活性，无外源内切、外切核酸酶污染。\n第一链的合成\n1. 参考下表进行体系配制；\nComponent\nFinal Concentration\nOligo(dT)12-18 Primer\n50 pmol\nOr\nRandom Primer *\n50 pmol（20~100 pmol）\nOr\nGene specific Primer *\n2 pmol\ndNTPs（10 mM each）\n1 µL\nTemplate RNA\ntotal RNA ≤5 µg；mRNA ≤1 µg；\nRNase-free dH2O\nTo 10 µL\n*根据实验需要选择不同类型的引物。\n2. 65℃加热5 min，冰上迅速降温2 min；\n",
  "Neoscript RTase HS Ⅱ\n货号：E43\n2026V01\n3. 在上述体系中再加入以下组分，至总体积为20 µL，轻轻混匀。\nComponent\nFinal Concentration\n5×First-Strand Buffer\n4 µL\n200 U/µL Neoscript RTase HS Ⅱ\n1 µL\n40 U/µL RNase Inhibitor\n1 µL\nRNase-free dH2O\nTo 20 µL\n4. 按如下条件进行反应。\n（1）如使用Random Primer 随机引物，应先于25℃温浴10 min；然后50℃温浴30~60 min；\n（2）如使用Oligo dT 或特异性引物，则于50℃温浴30~60 min。\n5. 95℃加热5 min 灭活Neoscript RTase HS Ⅱ，终止反应。\n6. 逆转录产物可直接用于PCR 反应和荧光定量PCR 反应，或置于-20℃长期保存。\nPCR 反应\n1. 参考下表进行体系配制：\nComponent\nFinal Concentration\n10×PCR Buffer (Mg\n2+ free)\n1×\ndNTPs（10 mM each）\n200 µM\n25 mM MgCl2\n1~4 mM\n5 U/µL Taq DNA Polymersase\n2~2.5 U\nPrimer 1（10 µM）\n0.2~1 µM\nPrimer 2（10 µM）\n0.2~1 µM\nTemplate *\n≤10%第一链反应液（2 µL）\nddH2O\nTo 50 µL\n*如若第一链反应液加入量过多，可能会抑制PCR 反应。\n2. PCR 反应程序：\n步骤\n温度\n时长\n循环数\n变性\n95℃\n2~5 min\n1\n变性\n95℃\n10~20 s\n30~40\n退火\n50~60℃\n10~30 s\n延伸\n72℃\n10~60 s\n技术说明\n1. 适用于50℃~55℃范围内进行反转录温度优化。\n2. 具有更好的稳定性，适用于高温反转录扩增，有利于有效通过RNA 复杂结构区域，适用于一步法多重荧光定量RT-PCR 检测。\n3. 与各种PCR 扩增酶具有良好的兼容性，适用于高灵敏度RT-PCR 反应。\n4. 适用于高灵敏度一步法荧光定量RT-PCR 反应，有效提高低浓度模板的检出率。\n5. 适用于cDNA 文库构建。\n6. 3’和5’RACE。\n"
 ],
 "官网品名": "Neoscript® RTase HS Ⅱ【反转录酶 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/45242",
 "说明书URL": "http://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/pd/2/0/c/20c8d18898ef853929042c2a595623c5.pdf",
 "说明书文件名": "E43 说明书",
 "PDF字节": 1780976
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