{
 "页数": 6,
 "全文字符数": 6359,
 "体系配置候选": [
  {
   "页": 5,
   "原文": "4. 请在试剂盒标识的有效期内使用产品，各组分按标签条件储存。不同批号的试剂组分不可混用。本试剂盒不可与其他商品"
  },
  {
   "页": 5,
   "原文": "6. 所有组分在使用前需平衡至室温，液体试剂充分混匀后再取样。预制酶标板为可拆卸板条，可根据实验需求拆取。剩余未"
  }
 ],
 "反应程序候选": [
  {
   "页": 2,
   "原文": "酶标板条，及时封口并放置2-8℃冰箱保存。请勿"
  },
  {
   "页": 2,
   "原文": "前可放置37℃直至结晶完全溶解。用新鲜制备的超"
  },
  {
   "页": 3,
   "原文": "1. 未拆封产品放置2-8℃保存，有效期为12 个月。拆封后酶标板放置2-8℃保存，有效期为1 个月。校准品复溶后放置2-8℃"
  },
  {
   "页": 3,
   "原文": "3. 试剂盒中物料使用结束后需及时放回2-8℃储存条件下保存。"
  },
  {
   "页": 3,
   "原文": "1. 将试剂盒放至室温（25±3℃）至少平衡20 min。"
  },
  {
   "页": 3,
   "原文": "2. 若浓缩洗液（20×）出现结晶，37℃温育直至结晶全部溶解。"
  },
  {
   "页": 3,
   "原文": "3. 取出实验所需酶标板条，剩余酶标板条放置铝箔袋中封口，立即放置2-8℃保存。"
  },
  {
   "页": 3,
   "原文": "精确量取500μL 超纯水于西林瓶中，轻柔颠倒混匀，室温静置约5min，确认无肉眼可见不溶物，得到校准品复溶液。根据"
  },
  {
   "页": 4,
   "原文": "板，保持室温（25±3℃）在微孔板振荡器上孵育120min，微孔板振荡器速度保持在550 rpm。"
  },
  {
   "页": 4,
   "原文": "将适量显色液倒入加样槽中，立即用多通道移液器每孔分别加入100 μL 显色液，保持室温（25±3℃）避光静置显色15 min。"
  },
  {
   "页": 5,
   "原文": "将适量终止液倒入加样槽中，每孔加入50 μL 终止液，静置3min 后用酶标仪进行读数。"
  },
  {
   "页": 5,
   "原文": "请在反应终止后15 min 内进行数据读取，否则会影响结果的准确性。"
  },
  {
   "页": 6,
   "原文": "实验前将试剂盒从冰箱拿出，室温平衡至少20 min 再使用"
  },
  {
   "页": 6,
   "原文": "浅，可适当延长显色时间或注意调整室温至25℃左右。"
  }
 ],
 "文中货号": [
  "E030",
  "JM109",
  "OD450",
  "V01"
 ],
 "逐页文本": [
  "E. coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒\n（酶联免疫吸附法·一步法）\n货号：BP-QP-E030\nV01\n1 / 6\n产品名称\nE.coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒（酶联免疫吸附法·一步法）\n包装规格\n\n32 T/盒\n\n96 T/盒\n预期用途\nE.coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒（酶联免疫吸附法·一步法）适用于碱裂解法质粒制备工艺所得到的工艺中间品及质粒\n原液中克隆菌宿主细胞蛋白（Host Cell Protein，HCP）的定量检测，如mRNA 疫苗、病毒载体类基因治疗、CAR-T 等生物\n制品中克隆菌HCP 的残留检测。本试剂盒可用于工艺优化、过程监测与产品放行。本产品属于通用型试剂盒，可广泛识别和\n检测克隆菌株DH5α、Top10、JM109、Stb13 来源产品中的HCP，对其它克隆菌株来源的HCP，需验证样本适用性。\n本试剂盒仅供研究使用，不能用于医学诊断。\n检验原理\n本试剂盒基于酶联免疫吸附法（Enzyme-linked Immunosorbent Aassy, ELISA）检测原理，采用双抗体夹心法测定样品中的\nE.coli 克隆菌HCP 含量。该检测体系用针对克隆菌HCP 的多克隆抗体作为捕获抗体，预先包被于96 微孔板表面，加入校准\n品或待测样品和辣根过氧化物酶（HorseradishPeroxidase, HRP）标记的酶标检测抗体，形成“捕获抗体-HCP 抗原-酶标检\n测抗体”的夹心免疫复合物。经洗涤后，加入显色液（3,3',5,5'-四甲基联苯胺, TMB）显色，TMB 在HRP 的催化下由无色转\n化成蓝色并在酸的作用下最终转化成黄色，产生的吸光度信号（检测主波长：450 nm；参比波长620 nm～650 nm）与HCP\n含量在一定范围内呈正相关，通过建立HCP 校准品浓度与吸光度之间的标准曲线，采用四参数拟合模型（4-Parameter\nLogistic , 4PL)计算待测样品中宿主蛋白残留水平。\n该方法利用抗体和抗原之间的高度特异性识别特性，实现对克隆菌来源复杂HCP 的高灵敏度检测。本试剂盒所用多克隆抗体\n经过质谱覆盖率验证（Antibody Affinity Extraction-Mass Spectrometry，AAE-MS），结果表明该抗体可识别绝大多数HCP。\n首次使用本试剂盒时建议先做样品的适用性验证，确定合适的样本稀释方案，同时确认样品基质不会对试剂盒体系造成检测干\n扰。\n图1 检测原理示意图\n产品性能\n",
  "E. coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒\n（酶联免疫吸附法·一步法）\n货号：BP-QP-E030\nV01\n2 / 6\n1. 本试剂盒经充分评估，标曲范围为1-243 ng/mL。\n2. 检测限为零校准品均值加上三倍标准偏差所对应的浓度，本试剂盒检测限约为0.25 ng/mL。\n3. 定量限为零校准品均值加上十倍标准偏差所对应的浓度，本试剂盒定量限约为0.82 ng/mL。\n4. 板内精密度小于10%，板间精密度小于15%。\n5. 专属性：与毕赤酵母、MDCK、Sf9、CHO HCP 均无交叉反应。\n主要组成成分\n表1 ELISA 试剂盒主要组成成分\n组分\n32T 规格\n96T 规格\n产品号\n说明\n储存温度\nE.coli 克隆菌\nHCP 校准品\n1 瓶\n2 瓶\nBPA-002\n产品为冻干粉，精确量取500μL 超纯水复溶，静置\n约5 分钟直至无肉眼可见不溶物。产品信息详见标\n签。\n2-8°C\n抗E.coli 克隆菌\nHCP 预包被酶标\n板\n32 孔\n96 孔\nBPB-002\n已包被适量的克隆菌HCP 捕获抗体，放置于抽真\n空的铝箔袋中，含两枚干燥片。使用后若有剩余的\n酶标板条，及时封口并放置2-8℃冰箱保存。请勿\n长时间放置室温。\nE.coli 克隆菌\nHCP 检测抗体\n（100×）\n40μL×1 管\n120μL×1 管\nBPC-002\n产品为无色液体溶液，是HRP 标记后的多克隆抗\n体，需稀释100 倍使用，应避光保存。\n显色液\n4 mL×1 瓶\n12 mL×1 瓶\nBPD-001\n产品为无色液体溶液，如发现溶液变蓝色，请勿使\n用。使用前需在室温平衡20 分钟以上，应避光保\n存。\n终止液\n3 mL×1 瓶\n6 mL×1 瓶\nBPE-001\n产品为酸性溶液，操作过程做好通风，避免接触皮\n肤、眼睛及衣物。\n稀释液\n25 mL×1 瓶\n50 mL×1 瓶\nBPF-001\n产品为玫红色液体溶液，用于校准品、检测抗体和\n样本的稀释，初次检测的样本需摸索确认最佳稀释\n倍数。\n浓缩洗液（20×）\n25 mL×1 瓶\n50 mL ×1\n瓶\nBPG-001\n产品为蓝色液体溶液，低温时容易结晶析出，使用\n前可放置37℃直至结晶完全溶解。用新鲜制备的超\n纯水稀释20 倍使用，用于酶标板样品孵育后洗涤。\n封板膜\n1 张\n2 张\nBPI-001\n用于样品孵育反应时密封覆盖酶标板条，防止污染\n和溶液挥发。\n说明书\n1 份\n1 份\n/\n用于指导客户进行实验室操作\n未提供但需准备\n",
  "E. coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒\n（酶联免疫吸附法·一步法）\n货号：BP-QP-E030\nV01\n3 / 6\n\n涡旋振荡器\n\n洗板机\n\n微孔板振荡器\n\n酶标仪\n\n加液槽\n\n微量移液器与配套灭菌枪头\n\n吸水纸等耗材\n储存条件及有效期\n1. 未拆封产品放置2-8℃保存，有效期为12 个月。拆封后酶标板放置2-8℃保存，有效期为1 个月。校准品复溶后放置2-8℃\n保存，有效期为7 天。\n2. 酶标板拆封使用后，剩余部分应放于铝箔袋中密封保存。\n3. 试剂盒中物料使用结束后需及时放回2-8℃储存条件下保存。\n4. 产品批号及有效期见产品包装标签。\n实验流程\n图2 操作流程示意图\n一、实验前准备\n1. 将试剂盒放至室温（25±3℃）至少平衡20 min。\n2. 若浓缩洗液（20×）出现结晶，37℃温育直至结晶全部溶解。\n3. 取出实验所需酶标板条，剩余酶标板条放置铝箔袋中封口，立即放置2-8℃保存。\n二、试剂配制\n1. 洗涤工作液配制\n确认浓缩洗液（20×）无结晶，按浓缩洗液（20×）：超纯水=1：19 体积比进行稀释配制，例如15 mL 浓缩洗液（20×）\n加入285 mL 新鲜配制的超纯水混匀，必须精确量取配制。稀释后的溶液即为洗涤工作液，用于酶标板洗板。\n2. 校准品复溶\n精确量取500μL 超纯水于西林瓶中，轻柔颠倒混匀，室温静置约5min，确认无肉眼可见不溶物，得到校准品复溶液。根据\n标签校准品含量计算浓度，例如标签标识值为1.5μg，加入500μL 超纯水复溶，则复溶后校准品浓度为3.0μg/mL。\n",
  "E. coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒\n（酶联免疫吸附法·一步法）\n货号：BP-QP-E030\nV01\n4 / 6\n注：不可使用其它体积复溶，所用移液器需经过校准，有较好的精密度，否则会出现较大稀释误差，影响实验结果。\n3. 检测抗体工作液配制\n将E.coli 克隆菌HCP 检测抗体（100×）用稀释液稀释100 倍，例如25μL E.coli 克隆菌HCP 检测抗体（100×）加入2475\nμL 稀释液中，轻柔混匀，即得到配制好的检测抗体工作液。检测抗体工作液需现配现用。\n4. 校准曲线配制\n校准曲线参考稀释方案见表2，校准品稀释所用移液器需经过校准，有较好的精密度，否则会出现较大稀释误差，影响实验结\n果。\n表2 校准品梯度稀释参考方案\n校准曲线\n稀释方案\n浓度（ng/mL）\nST1\n复溶后校准品用稀释液稀释至ST1\n（例如：3.0μg/mL 复溶后校准品243 μL+稀释液2757 μL）\n243\nST2\n300μL ST1 + 600μL 稀释液\n81\nST3\n300μL ST2 + 600μL 稀释液\n27\nST4\n300μL ST3 + 600μL 稀释液\n9\nST5\n300μL ST4 + 600μL 稀释液\n3\nST6\n300μL ST5 + 600μL 稀释液\n1\nST7\n(Blank）\n稀释液\n0\n5. 样本稀释\n\n初次测试的样本需进行梯度稀释摸索，确定最小稀释倍数。若您的样本为过程工艺样本，其浓度高于本检测方法的分析\n范围，可高于最小稀释倍数进行稀释，但应评估其稀释线性，以确保检测方法准确。建议对样本进行加标回收研究，以\n确定无样品基质的干扰，确保HCP 残留检测结果的准确性和可靠性。如原液样本有轻微基质干扰，可通过适当稀释去除\n基质干扰。\n\n若不是初次使用本试剂盒，可按照验证过的稀释方案和加标方案对样本进行HCP 残留检测。\n三、检测步骤\n1. 加入检测抗体工作液\n将稀释好的检测抗体工作液轻微混匀，倒入加样槽中，用多通道移液器加入100μL/孔检测抗体工作液，注意勿引入气泡。注\n意多通道移液器加液精度，如多通道移液器枪头中液面出现肉眼可见不齐，需重新吸取或者更换多通道移液器。\n2. 加入标准品/样本\n加入100μL 稀释后的ST1-ST6 E.coli 克隆菌HCP 校准品、ST7（阴性对照）、稀释好的样本（包括加标样本）。封板膜封\n板，保持室温（25±3℃）在微孔板振荡器上孵育120min，微孔板振荡器速度保持在550 rpm。\n\n请务必保证校准品、阴性对照、样本和检测抗体的加样在10 分钟内连续进行。\n\n不同品牌振荡器可能在同一转速下震荡频率不一致，可根据不同振荡器调节转速，保证每孔溶液充分混匀且不洒出即可。\n3. 洗涤\n孵育完成后，弃去各孔内液体，每孔分别加入300 μL 洗涤工作液，静置10 秒后弃去孔内液体；继续重复以上操作4 次，洗\n板结束在吸水纸上轻轻拍干。\n4. 显色\n将适量显色液倒入加样槽中，立即用多通道移液器每孔分别加入100 μL 显色液，保持室温（25±3℃）避光静置显色15 min。\n注意显色步骤请勿振荡，否则会造成本底升高，检测精密度变差。\n",
  "E. coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒\n（酶联免疫吸附法·一步法）\n货号：BP-QP-E030\nV01\n5 / 6\n5. 终止\n将适量终止液倒入加样槽中，每孔加入50 μL 终止液，静置3min 后用酶标仪进行读数。\n\n请注意终止液加样顺序需和显色液加样顺序保持一致，以保证孔间显色时间的一致性。\n6. 数据读取\n选择酶标仪主波长450 nm，参考波长630 nm，测定各孔450 nm 及630 nm 吸光值。\n\n请在反应终止后15 min 内进行数据读取，否则会影响结果的准确性。\n四、结果分析\n1. 各孔OD 值=450 nm 吸光值-630 nm 吸光值，若酶标仪没有配备参考波长（630 nm），只测OD 值=450 nm 吸光值，则\n每个校准品和样本的OD 值应减去空白孔的OD 值。若待测样品浓度的OD 值超出标准曲线最高值，宜对样品做进一步稀释后\n再检测。\n2. 本试剂盒建议以标准品浓度作为横坐标，OD 值为纵坐标，采用四参数方式进行曲线拟合，标曲的拟合软件可以用酶标仪\n自带的软件，若无，则建议采用专业的标曲制作软件，如Curve Expert，ELISACalc 等。标准曲线相关系数R\n2≥0.99，否则\n实验无效。\n3. 建议设置2-3 复孔，应先计算其平均值再进行曲线拟合。\n4. 将待测样品测定的OD 值代入标准曲线的拟合方程中，计算出样品浓度，即为待测样品中E.coli 宿主蛋白HCP 浓度。如\n待测样品有被稀释，计算结果时应乘以稀释倍数。若有对样品进行加标测试，则加标回收率应符合相应法规的方法学验证要\n求。\n5. 一种典型的标准曲线如下，数据仅作参考，具体以实际测试为准：\n注意事项\n1. 本试剂盒仅供研究使用。\n2. 所有的样本和试剂理被认为具有潜在危害。为了您的安全和健康，请穿戴实验服与一次性手套等防护措施。避免试剂直接\n接触皮肤和眼睛。如不慎接触，请立即用大量清水清洗。\n3. 使用本试剂盒前，请详细阅读产品说明书。\n4. 请在试剂盒标识的有效期内使用产品，各组分按标签条件储存。不同批号的试剂组分不可混用。本试剂盒不可与其他商品\n化试剂盒混用。\n5. 为避免微生物的污染，以及试剂与样本间的交叉污染，请使用一次性枪头，请使用干净的容器、加样槽配制和暂存试剂，\n封板膜不可重复使用。\n6. 所有组分在使用前需平衡至室温，液体试剂充分混匀后再取样。预制酶标板为可拆卸板条，可根据实验需求拆取。剩余未\n用部分请及时放回含干燥剂的铝箔袋中，密封低温保存。宜避免对酶标板底部刮花或其他影响光密度测量的操作。\n7. 洗板推荐使用洗板机，洗板过程中避免串流或气泡，以防影响实验结果准确性。最后一次洗板后，应将板孔中残留的液体\nSTD（ng/mL）\nMean-OD450-630nm\n243\n2.529\n81\n1.259\n27\n0.479\n9\n0.172\n3\n0.078\n1\n0.045\n0\n0.033\nR\n2\n1.00000\n",
  "E. coli 克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒\n（酶联免疫吸附法·一步法）\n货号：BP-QP-E030\nV01\n6 / 6\n轻轻拍干。\n8. 每次测定时，需生成新的标准曲线。\n9. 不同批次的试剂盒不建议混用。\n10. 酶标板洗板完成后请立即加显色液，勿让酶标板长时间处于干燥状态。\n常见异常排查\n实验OD 值整体偏低\n试剂盒未平衡完全\n实验前将试剂盒从冰箱拿出，室温平衡至少20 min 再使用\n试剂混用或保存不当\n不同批次试剂不可混用；各试剂请按说明书指导温度存放\n孵育时间/温度和说明书不一致\n请严格按照说明书要求进行孵育。冬天室温较低时，如显色较\n浅，可适当延长显色时间或注意调整室温至25℃左右。\n样本制备不合适\n重新制备标曲和样本\n实验OD 值整体偏高\n孵育时间/温度和说明书不一致\n请严格按照说明书要求进行孵育反应\n样本制备不合适\n重新制备标曲和样本\n标曲正常，样本显色\n异常\n样本稀释倍数不合适\n建议对初测样品做4-5 个稀释梯度，确保至少有一个值可以落\n在检测范围\n钩状效应\n在确保检测浓度落在检测范围内的前提下，提高稀释倍数\n样本保存不当或反复冻融次数过多\n尽量使用分装冻存不超过3 个月的样本；分装使用，减少反复\n冻融次数\n样本原液中存在干扰因素\n在确保检测浓度落在检测范围内的前提下，提高稀释倍数，减\n轻干扰影响；无法解决时，联系我司技术人员进行专项调整\n样本中待测物含量过低\n降低稀释倍数或浓缩样本后再加样\n背景值高\n孵育时间/温度和说明书不一致\n请严格按照说明书要求进行孵育反应\n微孔板反应前未覆盖封板膜\n孵育时应覆盖封板膜，防止液体蒸发和杂物污染\n洗涤或加样操作过程异常，不慎带\n入污染\n使用试剂盒自带洗液，确保洗涤次数和洗液体积充分，洗涤后\n孔内干净无残留；确保实验操作区域的环境洁净\n显色未避光/时间长\n显色时应避光，显色时间参考说明书\n变异系数（CV）较大\n移液器不准\n使用校准后的移液器并正确操作\n边缘效应\n确保所有试剂和酶标板均为同一温度\n试剂混用\n不同批次试剂不可混用\n加标回收率超出限\n定范围\n基质干扰\n通过线性稀释和回收率实验评估基质效应。在确保检测浓度落\n在检测范围内的前提下，提高稀释倍数，减轻干扰影响；无法\n解决时，联系我司技术人员进行专项调整\n加标浓度选取不合适\n加标浓度的设定最好大于实际样品中目标分析物的浓度；低浓\n度下加标浓度的选择，不宜小于定量限\n异常现象\n可能原因\n解决思路\n"
 ],
 "官网品名": "E.coli克隆菌宿主蛋白残留检测试剂盒（酶联免疫吸附法·一步法）【宿主细胞残留蛋白检测 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/87231",
 "说明书URL": "http://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/pd/2/a/5/2a583f54f3154d9b8c9c968bf4417301.pdf",
 "说明书文件名": "BP-QP-E030 说明书",
 "PDF字节": 1492037
}