{ "页数": 4, "全文字符数": 5267, "体系配置候选": [ { "页": 1, "原文": "试剂盒组分" }, { "页": 1, "原文": "不同批号试剂盒中各组分不可以互换。" }, { "页": 4, "原文": "4、不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。" }, { "页": 4, "原文": "8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。" } ], "反应程序候选": [ { "页": 1, "原文": "1、置于≤-18℃下避光保存，有效期24 个月。" }, { "页": 3, "原文": "50℃：2 分钟" }, { "页": 3, "原文": "95℃：3 分钟" }, { "页": 3, "原文": "95℃：10 秒，57℃（采集荧光）：1 分钟30 秒" }, { "页": 3, "原文": "25℃*：10S" }, { "页": 3, "原文": "*若荧光PCR 仪温度无法设置25℃，可将冷却步骤温度设置为37℃。" }, { "页": 4, "原文": "1、试剂盒应在-18℃及以下保存。" } ], "文中货号": [ "ABI7500", "QN82-100" ], "逐页文本": [ "版本：01 版\n1 / 4\n【产品名称】\nHela 细胞残留DNA 片段分析检测试剂盒（PCR-荧光探针法）\n【产品货号】\nBP-QN82-100\n【包装规格】\n4×100 Reactions/盒\n【预期用途】\n本试剂盒是用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中Hela 宿主细胞DNA 残\n留片段大小分布的试剂盒。\n【产品简介】\n本试剂盒采用PCR 荧光探针法，针对Hela 基因组的保守序列，设计了四种不同的扩增片段(66bp、\n177bp、200bp、528bp）来定量检测分析样本中Hela 残留DNA 片段大小的分布情况。试剂盒含有\n外源性内标，内标可以与样本一起参与提取扩增，用于监控提取与扩增是否异常，防止假阴性的产生。\n本试剂盒含有UDG 酶，用于预防扩增产物的污染。\n本试剂盒与珠海横琴宝锐核酸提取或纯化试剂盒配套使用。\n【主要成分与含量】\n试剂盒组分\n规格（4×100 Reactions/盒）\nHela 片段-66bp qPCR MIX\n1.0mL×2 管\nHela 片段-177bp qPCR MIX\n1.0mL×2 管\nHela 片段-200bp qPCR MIX\n1.0mL×2 管\nHela 片段-528bp qPCR MIX\n1.0mL×2 管\nHela 片段内标*\n1.0mL×1 管\nHela 片段阴性对照\n1.0mL×2 管\nHela 片段校准品ST1\n1.0mL×1 管（30fg/μL）\nHela 片段校准品ST2\n1.0mL×1 管（300fg/μL）\nHela 片段校准品ST3\n1.0mL×1 管（3pg/μL）\nHela 片段校准品ST4\n1.0mL×1 管（30pg/μL）\nHela 片段校准品ST5\n1.0mL×1 管（300pg/μL）\n说明：\n不同批号试剂盒中各组分不可以互换。\n实验操作中需要但试剂盒中未提供的试剂：核酸提取或纯化试剂盒。\n*若不使用试剂盒内标功能，提取时无需添加内标，程序设置时不设置CY5 通道，结果分析时无需关\n注CY5 结果。\n*若样品提取时未添加内标，扩增时加内标，则配制MIX 时每反应液加1µL 内标，分装qPCR MIX 时\n分装21µL/反应，此时PCR 总反应体积为31µL/反应。\n【储存条件及有效期】\n1、置于≤-18℃下避光保存，有效期24 个月。\n2、避免反复冻融，反复冻融次数不超过7 次。\n3、产品有效期及失效日期见标签。\n【适用机型】\n包括但不限于以下机型：SLAN-96P、SLAN-96S 全自动医用PCR 分析系统；ABI7500、ABl\n", "版本：01 版\n2 / 4\nQuantStudio™5 实时荧光定量PCR 仪；Roche LightCycler 480 荧光定量PCR 仪；伯乐CFX96 定\n量PCR 仪。\n【检验方法】\n从试剂盒中取出Hela 片段-66bp qPCR MIX、Hela 片段-177bp qPCR MIX、Hela 片段-200bp\nqPCR MIX、Hela 片段-528bp qPCR MIX、Hela 片段内标、Hela 片段阴性对照、Hela 片段校准品\nST1-ST5，置于室温融化，充分振荡混匀后瞬时离心备用。\n1. 加样回收质控ERC 制备\n根据需要设置ERC 中的Hela 片段加样浓度（加标浓度一般为样品实际残留DNA 浓度的2-10\n倍，以制备30pg Hela 片段量的ERC 为例），具体操作如下：\n1）取100μL 待测样本加入1.5mL 干净的离心管中；\n2）加入10μL ST3 后混匀瞬时离心，标记为样本ERC。样本ERC 和同批待测样本一起进行核酸提取\n纯化，得到的核酸即为样本ERC 核酸。\n2. 反应液准备\n2.1 根据待测标本数，计算所需的PCR 反应液数，一般建议做3 个重复/样。\nPCR 反应液数=（5 个浓度梯度的标准曲线+1 个无模板对照NTC+1 个阴性质控NCS+待测样本+\n待测样本ERC）×3。然后将相应数量的PCR 反应液，按照每孔20μL 的量分装至96 孔PCR 板或者\nPCR 八连管中。\n注：为满足同步进行四种扩增片段检测，DNA 模板需≥120μL，建议每个样品同时准备2 管进\n行前处理，提取完成后混匀使用。\n2.2 各反应孔加样示例：\n表1 Hela 片段-66bp/177bp/200bp/528bp 各反应孔加样示例\n组分\n加样量\n标准曲线\n20μL Hela 片段-66bp/177bp/200bp/528bp qPCR MIX + 10μL\nST1/ST2/ST3/ST4/ST5\nNTC\n20μL Hela 片段-66bp/177bp/200bp/528bp qPCR MIX + 10μL 阴性对照\nNCS\n20μL Hela 片段-66bp/177bp/200bp/528bp qPCR MIX + 10μL NCS 纯化液\n待测样本\n20μL Hela 片段-66bp/177bp/200bp/528bp qPCR MIX + 10μL 待测样本纯化液\n样本ERC\n20μL Hela 片段-66bp/177bp/200bp/528bp qPCR MIX + 10μL 样本ERC 纯化液\n2.3 孔板排版布局可参考下表：\n表2 Hela 片段-孔板排版示例\nMIX-66bp\nMIX-177bp\nMIX-200bp\nMIX-528bp\n1\n2\n3\n4\n5\n6\n7\n8\n9\n10\n11\n12\nA\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nNTC\nB\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nNCS\nC\nS\nS\nS\nS\nS\nS\nS\nS\nS\nS\nS\nS\nD\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nST1\nE\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nST2\nF\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nST3\nG\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nST4\nH\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\nST5\n", "版本：01 版\n3 / 4\n*该示例表示的是检测各片段梯度的DNA 标准曲线、1 个无模板对照NTC、1 个阴性质控NCS、1 个\n待测样品S。每个检测做3 个重复孔。其中1-3 列为66bp qPCR MIX，4-6 列为177bp qPCR MIX，\n7-9 列为200bp qPCR MIX，10-12 列为528bp qPCR MIX。\n*实际检测时可根据样品多少，参照此示例进行排版加样。\n3. 样本核酸提取\n操作步骤参照核酸提取或纯化试剂盒说明书，样本量为100μL，内标添加量为10μL。\n4. 荧光PCR 反应\n4.1 按照2.2 的方法将核酸加入到Hela 片段-66bp qPCR MIX、Hela 片段-177bp qPCR MIX、Hela\n片段-200bp qPCR MIX、Hela 片段-528bp qPCR MIX 中，盖好反应管盖或者用光学膜封闭96 孔PCR\n板，混匀后瞬时离心，转移到荧光PCR 仪器上。\n4.2 在荧光PCR 仪上运行以下程序：\n步骤\n条件\n循环数\nUDG 处理\n50℃：2 分钟\n1\n预变性\n95℃：3 分钟\n1\nPCR 扩增\n95℃：10 秒，57℃（采集荧光）：1 分钟30 秒\n40\n冷却\n25℃*：10S\n1\n荧光通道选择FAM、CY5，其中FAM 为Hela 片段，CY5 为Hela 片段内标。若仪器为ABI 系列，\n参比荧光选择ROX。\n*若荧光PCR 仪温度无法设置25℃，可将冷却步骤温度设置为37℃。\n5. 结果判定\n5.1 阈值线设定\n阈值线依据仪器噪声情况进行调整，取第3 到15 次循环的荧光强度均值加10 倍标准差，或采\n用阴性对照荧光值的最高点作为荧光阈值，或将阈值线设置到超过本底信号波动位置。\n5.2 内标的判读\n1）对于阴性样本和NCS 结果，内标Ct 值应≤35；\n2）对于阳性结果，可能会因为竞争抑制，导致阳性结果内标不出值或出值较差。\n*仅分析HEK293 片段-66bp 内标结果，其余片段无需分析内标结果。\n5.3 试验成立条件\n1）NTC 的CT 均值大于校准品最低浓度CT 均值；\n2）标准曲线线性相关性R\n2≥0.98，标准曲线最低点CT 值不高于39；\n3）每组加标样本的回收率应在50%-150%之间，RSD≤30%。\n6. 结果分析\n6.1 以SLAN-96P 为例：\n1）若需要调整阈值线，在“实验分析”面板的“参数设置”中，将阈值设置到合适高度；\n2）在“孔板编辑”面板中，将校准品的“样本类型”一栏设置为标准品，并且在“属性”一栏分别\n赋值为0.03、0.3、3、30、300（含义为每孔加入的DNA 浓度，单位为pg/μL），并且在相应的“样\n本名称”一栏中命名为ST1、ST2、ST3、ST4、ST5；\n3）在“实验分析”的“标准曲线”面板中，可读取标准曲线的斜率、截距、相关系数、扩增效率；\n4）在“实验分析”的“反应孔信息表”面板中，“浓度”一栏可读取检测结果的浓度值，单位为pg/\nμL。根据待测样本和样本ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在50%-150%之间。\n5）以66bp MIX 的待测样品检测值为100%，计算177bp MIX、200bp MIX、528bp MIX 的待测样品\n", "版本：01 版\n4 / 4\n百分比。\n6.2 以ABI 公司7500 qPCR 仪、软件版本2.4 为例：\n1）若需要调整阈值线，在Analysis 的Amplification Plot 面板中，将FAM 通道和CY5 通道Threshold\n设置到合适高度，点击Analyze；\n2）在Setup 的Plate Setup 面板中，将标准曲线孔的Task 一栏设置为Standard，并且在Quantity\n一栏分别赋值为0.03、0.3、3、30、300（含义为每孔加入的DNA 浓度，单位为pg/μL），并且在\n相应的Sample 一栏中命名为ST1、ST2、ST3、ST4、ST5。将无模板对照NTC 孔的Task 一栏设置\n为NTC，将阴性质控NCS 孔、待测样本孔、样本ERC 孔的Task 一栏设置为Unknown，并且在相\n应的Sample Name 一栏中命名为NTC、NCS、S、ERC；\n3）在Analysis 的Standard Curve 面板中，可读取标准曲线的Slope、Y-Inter、R\n2等；\n4）在Analysis 的View Well Table 面板中，Quantity 一栏可读取检测结果的浓度值，单位为pg/μ\nL。根据待测样本和样本ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在50%-150%之间。\n5）以66bp MIX 的待测样品检测值为100%，计算177bp MIX、200bp MIX、528bp MIX 的待测样品\n百分比。\n【注意事项】\n1、试剂盒应在-18℃及以下保存。\n2、实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过程中对时间、试剂体积等\n精确控制可以获得最好的结果。\n3、核酸提取有关耗材确保洁净、无DNase/RNase、无人源核酸残留及相关产物，提取过程尽量快\n速，完成后进入下一步实验或冷冻保存。\n4、不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。\n5、冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融，以免影响\n试剂性能。\n6、要带新的一次性PE 手套对反应管封盖，避免徒手或使用过的手套接触反应管，检测过程中使用\n不带荧光物质一次性无粉乳胶手套。\n7、实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区→模板提取区→扩增区→分析区顺序进行基因\n检测。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。\n8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。\n9、扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR 实验室进行无害化处理。\n10、如果样本中靶标为强阳性时，由于体系的竞争抑制，可能会对内标检测造成影响。\n11、建议使用各仪器新版本的软件进行实验及数据分析。\n【免责声明】\n在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任仅限于产品价值本身。\n【公司信息】\n邮箱：marketing@biori.com.cn\n网址：www.biori.com\n" ], "官网品名": "Hela残留DNA片段分析检测试剂盒（PCR-荧光探针法）【宿主细胞残留DNA片段分析 】", "详情页": "https://www.biori.com/product/44798", "说明书URL": "https://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/09/a40ed89fc260c1246fe611b8e6250034d9101555.pdf", "说明书文件名": "BP-QN82-100 说明书", "PDF字节": 620918 }