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   "原文": "不同批号试剂盒中各组分不可以互换。"
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   "原文": "4、不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。"
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   "原文": "8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。"
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 "反应程序候选": [
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   "原文": "1、置于≤-20℃下避光保存，有效期24 个月。"
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   "原文": "95℃：10 秒，60℃（采集荧光）：30 秒"
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   "原文": "1、试剂盒应在-20℃以下保存运输。"
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 "文中货号": [
  "ABI7500",
  "QN64-100"
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 "逐页文本": [
  "版本：02 版\n1 / 4\n【产品名称】\nE.coli 总RNA 残留检测试剂盒（PCR-荧光探针法）\n【货号】\nBP-QN64-100\n【包装规格】\n100 Reactions/盒\n【预期用途】\n本试剂盒是用于定量检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中残留的E.coli 总RNA 的专用\n试剂盒。\n【产品简介】\n本试剂盒采用PCR 荧光探针法，针对E.coli 基因组的保守序列，设计引物探针，能够定量检测\n样本中E.coli 总RNA。试剂盒含有外源性内标，内标可以与样本一起参与提取扩增，用于监控提取\n与扩增是否异常，防止假阴性的产生。本试剂盒含有UDG 酶，用于预防扩增产物的污染。\n本试剂盒与珠海横琴宝锐核酸提取或纯化试剂盒Ⅱ（磁珠法）、DNA 去除试剂盒配套使用。\n【主要成分与含量】\n试剂盒组分\n规格（100T/盒）\nE.coli RNA qPCR MIX1\n0.9mL×2 管\nE.coli RNA qPCR MIX2\n0.2mL×1 管\nE.coli RNA 内标*\n1.0mL×1 管\nE.coli RNA 阴性对照\n1.0mL×2 管\nE.coli RNA 校准品ST1\n0.5mL×1 管（0.2fg/μL）\nE.coli RNA 校准品ST2\n0.5mL×1 管（2fg/μL）\nE.coli RNA 校准品ST3\n0.5mL×1 管（20fg/μL）\nE.coli RNA 校准品ST4\n0.5mL×1 管（200fg/μL）\nE.coli RNA 校准品ST5\n0.5mL×1 管（2pg/μL）\nE.coli RNA 校准品ST6\n0.5mL×1 管（20pg/μL）\n说明：\n不同批号试剂盒中各组分不可以互换。\n实验操作中需要但试剂盒中未提供的试剂：核酸提取或纯化试剂盒、DNA 去除试剂盒。\n*若不使用试剂盒内标功能，提取时无需添加内标，程序设置时不设置ROX 通道，结果分析时无需关\n注ROX 结果。\n*若样品提取时未添加内标，扩增时加内标，则配制MIX 时每反应液加1µL 内标，分装qPCR MIX 时\n分装21µL/反应，此时PCR 总反应体积为41µL/反应。\n【储存条件及有效期】\n1、置于≤-20℃下避光保存，有效期24 个月。\n2、避免反复冻融，反复冻融次数不超过10 次。\n3、产品有效期及失效日期见标签。\n【适用机型】\n包括但不限于以下机型：SLAN-96P、SLAN-96S 全自动医用PCR 分析系统；ABI7500、ABl\nQuantStudio™5 实时荧光定量PCR 仪；Roche LightCycler 480 荧光定量PCR 仪；伯乐CFX96 定\n量PCR 仪。\n",
  "版本：02 版\n2 / 4\n【待测样本的前处理】\n待测样本在使用E.coli 总RNA 残留试剂盒做qPCR 检测前，需要进行DNA 去除试剂盒处理，以\n消除gDNA 对qPCR 检测的影响。根据样本类型分为以下两种样本处理情况：\n情况1：使用E.coli 宿主菌进行扩增的质粒DNA 类样本\n情况2：使用E.coli 宿主菌进行蛋白等表达产物制备的样品\n【检验方法】\n从试剂盒中取出E.coli RNA qPCR MIX1、E.coli RNA qPCR MIX2、E.coli RNA 内标、E.coli RNA\n阴性对照、E.coli RNA 校准品ST1~ST6，置于室温融化，充分震荡混匀后瞬时离心备用。\n1. 加样回收质控ERC 制备\n根据需要设置ERC 中的E.coli RNA 加样浓度（以制备加2pg E.coli RNA 量的ERC 为例），具\n体操作如下：\n1）取100μL 待测样本加入1.5mL 干净的离心管中；\n2）加入10μL ST4 后混匀瞬时离心，标记为样本ERC。样本ERC 和同批待测样本一起进行前处理，\n得到的核酸即为样本ERC 核酸。\n*加标量需根据实际情况进行调整，一般建议样品加标量设置为样品E.coli RNA 实际残留量的2-10\n倍。若样品E.coli RNA 实际残留量低于本试剂盒的定量限，加标量应设置到定量限范围之内，以保\n证检测结果的准确性。\n2. 阴性质控NCS 制备\n1）取100μL RNase-free H2O 加入1.5mL 干净的离心管中，标记为NCS；\n2）阴性质控NCS 和同批待测样本一起进行前处理，制备成NCS 纯化液。\n3. 反应液准备\n3.1 根据待测标本数，计算所需的PCR 反应液数，一般建议做3 个重复/样。\nPCR 反应液数=（6 个浓度梯度的标准曲线+1 个无模板对照NTC+1 个阴性质控NCS+待测样本+\n待测样本ERC）×3。\n3.2 根据反应孔数计算本次所需的qPCR MIX 预混液总量（含有2 孔的损失量）：\nqPCR MIX 预混液=（反应孔数+2）×20 μL\n3.3 各试剂置于室温融化，轻微振荡混匀，按下表所示加样：\n组分\n单孔反应\nE.coli RNA qPCR MIX1\n18μL\nE.coli RNA qPCR MIX2\n2μL\n总体积\n20μL\n待测样本、\n加标样本、\nNCS 等\n核酸提取\n或纯化试\n剂盒处理\nDNA 去除\n试剂盒处\n理\n80℃\n10min\n热灭活\n待测样本、\n加标样本、\nNCS 等\nDNA 去除\n试剂盒处\n理\n核酸提取\n或纯化试\n剂盒处理\n",
  "版本：02 版\n3 / 4\n3.4 各反应孔加样示例：\n组分\n加样量\n标准曲线\n20μL E.coli RNA qPCR MIX 预混液+20μL ST1/ST2/ST3/ST4/ST5/ST6\nNTC\n20μL E.coli RNA qPCR MIX 预混液+20μL 阴性对照\nNCS\n20μL E.coli RNA qPCR MIX 预混液+20μL NCS 纯化液\n待测样本\n20μL E.coli RNA qPCR MIX 预混液+20μL 待测样本纯化液\n样本ERC\n20μL E.coli RNA qPCR MIX 预混液+20μL 样本ERC 纯化液\n4. 样本核酸提取\n操作步骤参照核酸提取或纯化试剂盒说明书，样本量为100μL，内标添加量为10μL。\n5. 荧光PCR 反应\n5.1 按照3.4 的方法将核酸加入到20μL E.coli RNA qPCR MIX 预混液中，盖好反应管盖或者用光学\n膜封闭96 孔PCR 板，混匀后瞬时离心，转移到荧光PCR 仪器上。\n5.2 在荧光PCR 仪上运行以下程序：\n步骤\n条件\n循环数\nUDG 处理\n25℃：5 分钟\n1\n逆转录\n50℃：15 分钟\n1\n预变性\n95℃：3 分钟\n1\nPCR 扩增\n95℃：10 秒，60℃（采集荧光）：30 秒\n45\n荧光通道选择FAM、ROX，其中FAM 为E.coli RNA，ROX 为E.coli RNA 内标。若仪器为ABI\n系列，参比荧光选择none。\n6. 结果判定\n6.1 阈值线设定\n阈值线依据仪器噪声情况进行调整，将阈值设置到合适高度。\n6.2 内标的判读\n对于阴性结果内标Ct 值应≤30；对于阳性结果，可能会因为竞争抑制，导致阳性结果内标不出\n值或者出值较差。\n6.3 试验成立条件\n无模板对照NTC 的检测结果为其均值不超过0.1fg/μL，或根据实验室自身验证结果设定具体标\n准。标准曲线线性相关性R\n2＞0.99。\n7. 结果分析\n7.1 以SLAN-96P 为例：\n1）若需要调整阈值线，在“实验分析”面板的“参数设置”中，将阈值设置到合适高度；\n2）在“孔板编辑”面板中，将校准品的“样本类型”一栏设置为标准品，并且在“属性”一栏分别\n赋值为20、2、0.2、0.02、0.002、0.0002（含义为每孔加入的RNA 浓度，单位为pg/μL），并且\n在相应的“样本名称”一栏中命名为ST6、ST5、ST4、ST3、ST2、ST1；\n3）在“实验分析”的“标准曲线”面板中，可读取标准曲线的斜率、截距、相关系数、扩增效率;\n4）在“实验分析”的“反应孔信息表”面板中，“浓度”一栏可读取检测结果的浓度值，单位为pg/\nμL。后续可在检测报告中依据用户需要将单位换算为fg/μL 或pg/mL。根据待测样本和样本ERC 的\n检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在50%-150%之间。\n7.2 以ABI 公司7500 qPCR 仪、软件版本2.4 为例：\n",
  "版本：02 版\n4 / 4\n1）若需要调整阈值线，在Analysis 的Amplification Plot 面板中，将FAM 通道、ROX 通道Threshold\n设置到合适高度，点击Analyze；\n2）在Setup 的Plate Setup 面板中，将标准曲线孔的Task 一栏设置为Standard，并且在Quantity\n一栏分别赋值为20、2、0.2、0.02、0.002、0.0002（含义为每孔加入的RNA 浓度，单位为pg/μL），\n并且在相应的Sample 一栏中命名为ST6、ST5、ST4、ST3、ST2、ST1。将无模板对照NTC 孔的\nTask 一栏设置为NTC，将阴性质控NCS 孔、待测样本孔、样本ERC 孔的Task 一栏设置为Unknown，\n并且在相应的Sample Name 一栏中命名为NTC、NCS、S、ERC；\n3）在Analysis 的Standard Curve 面板中，可读取标准曲线的Slope、Y-Inter、R\n2等；\n4）在Analysis 的View Well Table 面板中，Quantity 一栏可读取检测结果的浓度值，单位为pg/μ\nL。后续可在检测报告中依据用户需要将单位换算为fg/μL 或pg/mL。根据待测样本和样本ERC 的\n检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在50%-150%之间。\n【注意事项】\n1、试剂盒应在-20℃以下保存运输。\n2、实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过程中对时间、试剂体积等\n精确控制可以获得最好的结果。\n3、核酸提取有关耗材确保洁净、无DNase/RNase、无E.coli 核酸残留及相关产物，提取过程尽量\n快速，完成后进入下一步实验或冷冻保存。\n4、不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。\n5、冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融，以免影响\n试剂性能。\n6、要带新的一次性PE 手套对反应管封盖，避免徒手或使用过的手套接触反应管，检测过程中使用\n不带荧光物质一次性无粉乳胶手套。\n7、实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区→模板提取区→扩增区→分析区顺序进行基因\n检测。各区间人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。\n8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。\n9、扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR 实验室进行无害化处理。\n10、如果样本中靶标为强阳性时，由于体系的竞争抑制，可能会对内标检测造成影响。\n11、建议使用各仪器新版本的软件进行实验及数据分析。\n【免责声明】\n在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任仅限于产品价值本身。\n【公司信息】\n邮箱：marketing@biori.com.cn\n网址：www.biori.com\n"
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 "官网品名": "E.coli总RNA残留检测试剂盒（PCR-荧光探针法）【宿主细胞残留RNA检测 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/44730",
 "说明书URL": "https://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/02/02e2a4b8c0b40a95892ae19796b3a2a30b11af85.pdf",
 "说明书文件名": "BP-QN64-100 说明书",
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