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   "原文": "不同批号试剂盒中各组分不可以互换。"
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   "原文": "三、体系配制及检测"
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   "原文": "4、不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。"
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   "原文": "8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。"
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 "反应程序候选": [
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   "原文": "1、置于≤-20℃下避光保存，有效期24 个月。"
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   "原文": "95℃：10 秒，60℃（采集荧光）：30 秒"
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   "原文": "1、试剂盒应在-20℃以下保存。"
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 "文中货号": [
  "ABI7500",
  "QN28-100"
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 "逐页文本": [
  "版本：06 版\n1 / 4\n【产品名称】\nrcAAV-2/N 检测试剂盒（PCR-荧光探针法）\n货号：BP-QN28-100\n【包装规格】\n100 Reactions/盒\n【预期用途】\n本试剂盒用于定量检测血清型rAAV-2/N (N 为不同的衣壳血清型)中rcAAV-2/N*污染率。样品类型包括但不限\n于重组腺相关病毒载体收获液、生产终末期细胞、纯化后的病毒载体原液以及基于细胞培养法检测rcAAV 的细胞样\n品等。\n*注意，在使用本试剂盒前请务必确定：\n1）AAV 血清型；\n2）待检测样品rAAV 的末端重复序列（ITR）与以下序列匹配。\nTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTT\nTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCT\n【产品简介】\n本试剂盒采用PCR-荧光探针法，试剂盒中包含两个体系：检测rcAAV 的体系和检测rAAV 的体系；两个体系\n校准品包含在同一定量参考品中，试剂盒可同时实现对rcAAV 和rAAV 快速、灵敏、特异的定量检测。\n试剂盒含有外源性内标，内标可以与样本一起参与提取扩增，用于监控提取与扩增是否异常，防止假阴性的产\n生。本试剂盒含有UDG 酶，用于预防扩增产物的污染。\n本试剂盒与珠海横琴宝锐核酸提取或纯化试剂盒配套使用。\n【主要成分与含量】\n试剂盒组分\n规格（100 Reactions/盒）\nTarget qPCR MIX\n1.0mL×2 管\nReference qPCR MIX\n1.0mL×2 管\nrcAAV-2/N 内标*\n1.0mL×1 管\nrcAAV-2/N 阴性对照\n1.0mL×2 管\nrcAAV-2/N 校准品ST1\n1.0mL×1 管（2×10\n1copies/μL）\nrcAAV-2/N 校准品ST2\n1.0mL×1 管（2×10\n2copies/μL）\nrcAAV-2/N 校准品ST3\n1.0mL×1 管（2×10\n3copies/μL）\nrcAAV-2/N 校准品ST4\n1.0mL×1 管（2×10\n4copies/μL）\nrcAAV-2/N 校准品ST5\n1.0mL×1 管（2×10\n5copies/μL）\n说明：\n不同批号试剂盒中各组分不可以互换。\n实验操作中需要但试剂盒中未提供的试剂：核酸提取或纯化试剂盒。\n*若不使用试剂盒内标功能，提取时无需添加内标，程序设置时不设置ROX 通道，结果分析时无需关注ROX 结果。\n*若样品提取时未添加内标，扩增时加内标，则配制MIX 时每反应液加1µL 内标，分装qPCR MIX 时分装21µL/反\n应，此时PCR 总反应体积为41µL/反应。\n【储存条件及有效期】\n1、置于≤-20℃下避光保存，有效期24 个月。\n2、避免反复冻融，反复冻融次数不超过10 次。\n3、产品有效期及失效日期见标签。\n【适用机型】\n",
  "版本：06 版\n2 / 4\n包括但不限于以下机型：SLAN-96P、SLAN-96S 全自动医用PCR 分析系统；ABI7500、ABl QuantStudio™5\n实时荧光定量PCR 仪；Roche LightCycler 480 荧光定量PCR 仪；伯乐CFX96 定量PCR 仪。\n【检验方法】\n一、待测样品的前处理\n待测样品进行检测前需进行核酸酶处理，以排除无蛋白衣壳保护的核酸片段的干扰。\n二、不同待测样品纯化液的检测说明\n本试剂盒针对直接qPCR 法或基于细胞培养法的使用方式有所不同：\n1. 直接qPCR 法\n1.1 根据检测的基因不同，需要对样品纯化液进行不同程度的稀释。\n1.2 针对Target 基因检测时，无需对样品纯化液进行稀释；而针对Reference 基因检测时，需要先将样品纯化液\n稀释到线性范围（20～2.0×10\n6copies/μL）内。\n例如：已知rAAV 病毒原液的浓度约为2.0E+12VG/mL，那么其样品纯化液可直接用于Target 基因检测，但应至少\n稀释1000 倍后才能用于Reference 基因检测。\n2. 基于细胞培养法：\n2.1 细胞转染前，先用Reference qPCR MIX 对rAAV 的浓度进行测定；\n注：同1 也需要将待测样本的提取纯化液稀释到线性范围（20～2.0×10\n6copies/μL）内；\n2.2 细胞转染后，再用Target qPCR MIX 对rcAAV 的浓度进行测定。\n三、体系配制及检测\n1. 试剂准备\n1.1 从试剂盒中取出Target qPCR MIX、Reference qPCR MIX、rcAAV-2/N 内标、rcAAV-2/N 阴性对照、rcAAV-2/N\n校准品ST1-ST5，置于室温融化，充分震荡混匀后瞬时离心备用。\n1.2 加样回收质控ERC 制备，根据需要设置ERC 中的加样浓度（以制备加2×10\n4copies 的ERC 为例），具体操\n作如下：\n1）取100μL 待测样本加入1.5mL 干净的离心管中。\n2）加入10μL rcAAV-2/N 校准品ST3 后混匀瞬时离心，标记为样本ERC。样本ERC 和同批待测样本一起进行核酸\n提取纯化，得到的核酸即为样本ERC 核酸。\n根据待测标本数，计算所需的PCR 反应液数，一般建议做3 个重复/样本。\nPCR 反应液数N=（5 个浓度梯度的校准品+1 个无模板对照NTC+1 个阴性对照样本NCS+待测样本+待测样本\nERC）×3。然后将相应数量的PCR 反应液，按照一孔20μL 的量分装至96 孔PCR 板或者PCR 八连管中。\n2. 核酸提取与纯化\n操作步骤参照核酸提取或纯化试剂盒说明书，样本量为100μL，内标添加量为10μL。\n3. 扩增和检测\n3.1 各反应孔加样示例：\n针对Target 体系：\n组分\n加样量\n标准曲线\n20μL Target qPCR MIX + 20μL ST1/ST2/ST3/ST4/ST5\nNTC\n20μL Target qPCR MIX + 20μL 阴性对照\nNCS\n20μL Target qPCR MIX + 20μL NCS 纯化液\n待测样本\n20μL Target qPCR MIX + 20μL 待测样本纯化液\n样本ERC\n20μL Target qPCR MIX + 20μL 样本ERC 纯化液\n针对Reference 体系：\n组分\n加样量\n标准曲线\n20μL Reference qPCR MIX + 20μL ST1/ST2/ST3/ST4/ST5\n",
  "版本：06 版\n3 / 4\nNTC\n20μL Reference qPCR MIX + 20μL 阴性对照\nNCS\n20μL Reference qPCR MIX + 20μL NCS 纯化液\n待测样本\n20μL Reference qPCR MIX + 20μL 待测样本纯化液\n样本ERC\n20μL Reference qPCR MIX + 20μL 样本ERC 纯化液\n3.2 孔板排版布局可参考下表：\n* 该示例表示的是检测1 个无模板对照NTC、1 个阴性对照样本NCS、1 个待测样品、1 个待测样品ERC，每个检\n测做3 个复孔。\n* 1/X 表示该样本稀释了X 倍。\n* 实际检测时可根据样品多少，参照此示例进行排版布局。\n3.3 将上述配制好的反应液，盖好反应管盖，混匀后瞬时离心，转移到荧光PCR 仪器上。\n3.4 在荧光PCR 仪上运行以下程序：\n步骤\n条件\n循环数\nUDG 处理\n50℃：2 分钟\n1\n预变性\n95℃：3 分钟\n1\nPCR 扩增\n95℃：10 秒，60℃（采集荧光）：30 秒\n45\n荧光通道选择FAM、ROX，其中FAM 为Target 和Reference DNA，ROX 为内标。若仪器为ABI 系列，参比\n荧光选择none。\n4. 结果判定\n4.1 阈值线设定\n阈值线依据仪器噪声情况进行调整，将阈值线设置到超过本底信号波动位置。阈值线设定应基于实验室验证数\n据，以满足检测限要求为基准。\n4.2 试验成立条件\n4.2.1 对于阴性结果内标Ct 值应≤35；对于阳性结果，可能会因为竞争抑制，导致阳性结果内标不出值或者出值\n较差。\n4.2.2 NTC、NCS 的FAM 通道显示Ct 值≥35 或无典型扩增曲线；标准曲线线性相关性R\n2＞0.98。\n5. 结果分析\n5.1 以SLAN-96P 为例：\n1）若需要调整阈值线，在“实验分析”面板的“参数设置”中，将阈值设置到合适高度,分析类型为定量；\n2）在“孔板编辑”面板中，将校准品的“样本类型”一栏设置为标准品，并且在“属性”一栏分别赋值为2×10\n1、\n2×10\n2、2×10\n3、2×10\n4、2×10\n5（含义为每孔加入的DNA 浓度，单位为copies/μL），并且在相应的“样本名\n称”一栏中命名为ST1、ST2、ST3、ST4、ST5；\n3）在“实验分析”的“标准曲线”面板中，可读取标准曲线的斜率、截距、相关系数、扩增效率；\n1\n2\n3\n4\n5\n6\n7\n8\n9\n10\n11\n12\nA\nNTC-\nTarget\nNTC-\nTarget\nNTC-\nTarget\nST1-\nTarget\nST1-\nTarget\nST1-\nTarget\nST1-\nReference\nST1-\nReference\nST1-\nReference\nB\nNCS-\nTarget\nNCS-\nTarget\nNCS-\nTarget\nST2-\nTarget\nST2-\nTarget\nST2-\nTarget\nST2-\nReference\nST2-\nReference\nST2-\nReference\nC\nS-\nTarget\nS-\nTarget\nS-\nTarget\nST3-\nTarget\nST3-\nTarget\nST3-\nTarget\nST3-\nReference\nST3-\nReference\nST3-\nReference\nD\nERC-\nTarget\nERC-\nTarget\nERC-\nTarget\nST4-\nTarget\nST4-\nTarget\nST4-\nTarget\nST4-\nReference\nST4-\nReference\nST4-\nReference\nE\nNTC-\nReference\nNTC-\nReference\nNTC-\nReference\nST5-\nTarget\nST5-\nTarget\nST5-\nTarget\nST5-\nReference\nST5-\nReference\nST5-\nReference\nF\nNCS-\nReference\nNCS-\nReference\nNCS-\nReference\nG\n1/X S-\nReference\n1/X S-\nReference\n1/X S-\nReference\nH\nERC-\nReference\nERC-\nReference\nERC-\nReference\n",
  "版本：06 版\n4 / 4\n4）在“实验分析”的“反应孔信息表”面板中，“浓度”一栏可读取检测结果的浓度值，单位为copies/μL。根\n据待测样本和样本ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在50%-150%之间；\n5）根据分析软件给出的待测样品各检测点的浓度（copies/μL），通过稀释倍数回算出待测样品的实际浓度。\n5.2 以ABI7500 qPCR 仪、软件版本2.4 为例：\n1）若需要调整阈值线，在Analysis 的Amplification Plot 面板中，将FAM 通道、ROX 通道Threshold 设置到超\n过本底信号波动位置，点击Analyze；\n2）在Setup 的Plate Setup 面板中，将标准曲线孔的Task 一栏设置为Standard，并且在Quantity 一栏分别赋\n值为2×10\n1、2×10\n2、2×10\n3、2×10\n4、2×10\n5（单位为copies/μL），并且在相应的Sample Name 一栏中命名\n为ST1、ST2、ST3、ST4、ST5；\n3）将无模板对照NTC 孔的Task 一栏设置为NTC，将阴性对照样本NCS 孔、待测样品孔、待测样品ERC 孔的Task\n一栏设置为Unknown，并且在相应的Sample Name 一栏中命名为NCS-Reference、NCS-Target、1/x S-Reference、\nS-Target、ERC-Reference、ERC-Target；\n4）在Analysis 的Standard Curve 面板中，可读取标准曲线的斜率（Slope）、截距（Intercept）、R\n2；\n5）在Analysis 的View Well Table 面板中，Quantity 一栏可读取检测结果的浓度值，单位为copies/μL。通过稀\n释倍数回算出待测样品的实际浓度。根据待测样本和样本ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在\n50%-150%之间。\n并根据以下公式计算rAAV 中rcAAV 的污染率：\n污染率=Target 的检测值÷（Reference 的检测值×稀释倍数÷2）\n注：每个rAAV 含有两个Reference 基因\n注：上述示例结果分析的参数设置仅供参考，具体需依据实验室机型及使用的软件版本进行设定，一般也可由仪器\n自动判读。\n【注意事项】\n1、试剂盒应在-20℃以下保存。\n2、实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过程中对时间、试剂体积等精确控制可以\n获得最好的结果。\n3、核酸提取有关耗材确保洁净、无DNase/RNase，提取过程尽量快速，完成后进入下一步实验或冷冻保存。\n4、不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。\n5、冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融，以免影响试剂性能。\n6、要带新的一次性PE 手套对反应管封盖，避免徒手或使用过的手套接触反应管底，检测过程中使用不带荧光物质\n一次性无粉乳胶手套。\n7、实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区→模板提取区→扩增区→分析区顺序进行基因检测。各区间\n人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。\n8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。\n9、扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR 实验室进行无害化处理。\n10、如果样本中靶标为强阳性时，由于体系的竞争抑制，可能会对内标检测造成影响。\n11、建议使用各仪器新版本的软件进行实验及数据分析。\n【免责声明】\n在所有情况下，本公司对此产品所承担的责任仅限于产品价值本身。\n【公司信息】\n邮箱：marketing@biori.com.cn\n网址：www.biori.com\n"
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 "官网品名": "rcAAV-2/N 检测试剂盒（PCR-荧光探针法）【复制型病毒检测 生物医药】",
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