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   "原文": "8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。"
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 "文中货号": [
  "ABI7500",
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 "逐页文本": [
  "猪细小病毒（PPV）核酸检测试剂盒\n（PCR-荧光探针法）说明书\n货号：BP-QN100-100\n版本：01 版\n本产品仅供研究用\n珠海横琴宝锐生物科技有限公司\n",
  "版本：01 版\n1 / 3\n【产品名称】\n猪细小病毒（PPV）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）\n【包装规格】\n100 Reactions/盒\n【预期用途】\n本试剂盒用于定量分析检测各种生物制品的中间品、半成品和成品中的猪细小病毒（PPV）核酸。\n【产品简介】\n本试剂盒采用PCR-荧光探针法，针对PPV DNA 序列设计引物探针，能够定量检测生物制品样品中的猪细小病\n毒（PPV）核酸。试剂盒含有外源性内标，内标可以与样本一起参与提取扩增，用于监控提取与扩增是否异常，防\n止假阴性的产生。本试剂盒含有UDG 酶，用于预防扩增产物的污染。\n本试剂盒与珠海横琴宝锐核酸提取或纯化试剂盒Ⅱ（磁珠法）配套使用，酸性或特殊类型基质的样本建议搭配\nDNA 样本前处理试剂盒使用。\n【主要成分与含量】\n试剂盒组分\n规格（100 Reactions/盒）\nPPV qPCR MIX\n1.0 mL/管×2 管\nPPV 阴性对照\n1.0 mL/管×2 管\nPPV 内标*\n1.0 mL/管×1 管\nPPV 校准品ST1\n0.5 mL×1 管（1.0×10\n1copies/μL）\nPPV 校准品ST2\n0.5 mL×1 管（1.0×10\n2copies/μL）\nPPV 校准品ST3\n0.5 mL×1 管（1.0×10\n3copies/μL）\nPPV 校准品ST4\n0.5 mL×1 管（1.0×10\n4copies/μL）\nPPV 校准品ST5\n0.5 mL×1 管（1.0×10\n5copies/μL）\nPPV 校准品ST6\n0.5 mL×1 管（1.0×10\n6copies/μL）\n说明：不同批号试剂盒中各组分不可以互换。\n实验操作中需要但试剂盒中未提供的试剂：核酸提取纯化试剂盒。\n*若不使用试剂盒内标功能，提取时无需添加内标，程序设置时不设置CY5 通道，结果分析时无需关注CY5 结\n果。\n*若样品提取时未添加内标，扩增时加内标，则配制MIX 时每反应液加1μL 内标，分装qPCR MIX 时分装21μ\nL/反应，此时PCR 总反应体积为31μL/反应。\n【储存条件及有效期】\n置于≤-18℃下避光保存，有效期24 个月。\n避免反复冻融，反复冻融次数不超过10 次。\n产品有效期及失效日期见标签。\n【适用机型】\n包括但不限于以下机型：SLAN-96P、SLAN-96S 全自动医用PCR 分析系统；ABI7500、ABl QuantStudio™5\n实时荧光定量PCR 仪；Roche LightCycler 480 荧光定量PCR 仪；伯乐CFX96 定量PCR 仪。\n【检验方法】\n从试剂盒中取出PPV qPCR MIX、PPV 内标、PPV 阴性对照、PPV 校准品ST1~ST6，置于室温融化，充分震荡\n混匀后瞬时离心备用。\n1.\n加样回收质控ERC 制备\n根据*需要设置ERC 中的PPV 加标浓度（加标浓度一般为样品实际残留核酸浓度的2-10 倍,以制备加1.0×\n10\n5copies 的ERC 为例），具体操作如下：\n",
  "版本：01 版\n2 / 3\n1）取100μL 待测样本加入1.5mL 干净的离心管中。\n2）加入10μL PPV 校准品ST4 后混匀瞬时离心，标记为样本ERC。样本ERC 和同批待测样本一起进行核酸提取纯\n化，得到的核酸即为样本ERC 核酸。\n*加标方案需要根据样品实际的残留DNA 浓度，确定是否需要稀释及最终的加标浓度。如果需要稀释建议使用本试\n剂盒阴性对照或者其他经验证的稀释液进行稀释，建议加标后标的浓度一般为样品残留DNA 浓度的2-10 倍。\n2. 反应液准备\n2.1 根据待测标本数，计算所需的PCR 反应液数，一般建议做3 个重复/样。\nPCR 反应液数=（6 个浓度梯度的校准品+ 1 个无模板对照NTC+ 1 个阴性质控NCS +待测样本+待测样本ERC）\n×3。然后将相应数量的PCR 反应液，按照每孔20μL 的量分装至96 孔PCR 板或者PCR 八连管中。\n2.2 各反应孔加样示例：\n组分\n加样量\n标准曲线\n20μL PPV qPCR MIX + 10μL ST1/ST2/ST3/ST4/ ST5/ ST6\nNTC\n20μL PPV qPCR MIX + 10μL 阴性对照\nNCS\n20μL PPV qPCR MIX + 10μL NCS 纯化液\n待测样本\n20μL PPV qPCR MIX + 10μL 待测样本纯化液\n样本ERC\n20μL PPV qPCR MIX + 10μL 样本ERC 纯化液\n3. 样本核酸提取：\n操作步骤参照核酸提取或纯化试剂盒的说明书，样本量为100μL，内标添加量为10μL。\n4. 荧光PCR 反应：\n4.1 按照2.2 的方法将核酸加入到PPV qPCR MIX 中，盖好反应管盖或者用光学膜封闭96 孔PCR 板，混匀后瞬时\n离心，转移到荧光PCR 仪器上。\n4.2 在荧光PCR 仪上运行以下程序：\n步骤\n条件\n循环数\nUDG 处理\n50℃：2 分钟\n1\n预变性\n95℃：3 分钟\n1\nPCR 扩增\n95℃：10 秒，60℃（采集荧光）：30 秒\n40\n冷却\n25℃*：10 秒\n1\n荧光通道选择FAM、CY5，其中FAM 为PPV DNA，CY5 为PPV 内标。若仪器为ABI 系列，参比荧光选择ROX。\n*若荧光PCR 仪温度无法设置25℃，可将冷却步骤温度设置为37℃。\n5. 结果判定\n5.1 阈值线设定\n阈值线依据仪器噪声情况进行调整，将阈值线设置到超过本底信号波动位置。\n5.2 内标的判读\n对于NCS 结果内标Ct 值应≤35；对于强阳性结果，可能会因为竞争抑制，导致阳性结果内标不出值或者出值\n较差。\n5.3 试验成立条件\nNTC，NCS 的FAM 通道应显示无Ct 值或Ct 值≥35；标准曲线线性相关性R\n2＞0.98。\n6. 结果分析\n6.1 以SLAN-96P 为例。\n1）若需要调整阈值线，在“实验分析”面板的“参数设置”中，将阈值线设置到超过本底信号波动位置。\n2）在“孔板编辑”面板中，将校准品的“样本类型”一栏设置为标准品，并且在“属性”一栏分别赋值为1.0×10\n",
  "版本：01 版\n3 / 3\n６、1.0×10\n5、1.0×10\n4、1.0×10\n3、1.0×10\n2、1.0×10\n1（含义为每孔加入的DNA 浓度，单位为copies/μL），并\n且在相应的“样本名称”一栏中命名为ST6、ST5、ST4、ST3、ST2、ST1。\n3）在“实验分析”的“标准曲线”面板中，可读取标准曲线的斜率、截距、相关系数、扩增效率。\n4）在“实验分析”的“反应孔信息表”面板中，“浓度”一栏可读取检测结果的浓度值，单位为copies/μL。根\n据待测样本和样本ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在50%～150%之间。\n6.2 以ABI 公司7500 qPCR 仪、软件版本2.4 为例。\n1）若需要调整阈值线，在Analysis 的Amplification Plot 面板中，将FAM 通道、ROX 通道Threshold 设置到超\n过本底信号波动位置，点击Analyze。\n2）在Setup 的Plate Setup 面板中，将标准曲线孔的Task 一栏设置为Standard，并且在Quantity 一栏分别赋\n值为1.0×10\n６、1.0×10\n5、1.0×10\n4、1.0×10\n3、1.0×10\n2、1.0×10\n1（含义为每孔加入的DNA 浓度，单位为copies/\nμL），并且在相应的Sample 一栏中命名为ST6、ST5、ST4、ST3、ST2、ST1。将无模板对照NTC 孔的Task 一\n栏设置为NTC，将阴性质控NCS 孔、待测样本孔、样本ERC 孔的Task 一栏设置为Unknown，并且在相应的Sample\nName 一栏中命名为NTC、NCS、S、ERC。\n3）在Analysis 的Standard Curve 面板中，可读取标准曲线的Slope、Y-Inter、R\n2 等。\n4）在Analysis 的View Well Table 面板中，Quantity 一栏可读取检测结果的浓度值，单位为copies/μL。根据待\n测样本和样本ERC 的检测结果计算加样回收率，加样回收率要求在50%～150%之间。\n【注意事项】\n1、试剂盒应在-18℃以下保存。\n2、实验前请仔细阅读本试剂盒说明书，严格按照操作步骤执行，在操作过程中对时间、试剂体积等精确控制可以\n获得最好的结果。\n3、核酸提取有关耗材确保洁净、无DNase/RNase，提取过程尽量快速，完成后进入下一步实验或冻保。\n4、不要使用过期组分或者不同批次组分混合使用。\n5、冻存试剂使用前应于室温下完全融化，瞬时离心使液体完全沉于管底。避免反复冻融，以免影响试剂性能。\n6、要带新的一次性PE 手套对反应管封盖，避免徒手或使用过的手套接触反应管底，检测过程中使用不带荧光物质\n一次性无粉乳胶手套。\n7、实验室应严格按照有关规定分区管理，依照配液区→模板提取区→扩增区→分析区顺序进行基因检测。各区间\n人员、器材、试剂及空气流向应有严格要求。\n8、样品、校准品等在使用后及时封盖，避免组分间及气溶胶等的污染造成假阳性。\n9、扩增产物禁止开盖，实验产生的废弃物应及时收集，远离PCR 实验室进行无害化处理。\n10、如果样本中靶标为强阳性时，由于体系的竞争抑制，可能会对内标检测造成影响。\n11、建议使用各仪器新版本的软件进行实验及数据分析。\n【免责声明】\n本产品仅供研究用，本公司对此产品所承担的责任仅限于产品价值本身。\n【公司信息】\n邮箱：marketing@biori.com.cn\n⽹址：www.biori.com\n"
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 "官网品名": "猪细小病毒（PPV）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）【病毒清除验证 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/44772",
 "说明书URL": "https://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/08/34ae796f9e97032fd46a14ad864c68998acfee67.pdf",
 "说明书文件名": "BP-QN100-100 说明书",
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