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 "逐页文本": [
  "CircRNA 合成试剂盒（一步法）\n2025V02\n货号：BP-17-50\n产品概述\n环状RNA（Circular RNA，circRNA）是一种通过典型的５'-3'磷酸二酯键形成的环形结构的RNA 分子。相比于线性RNA，\ncircRNA 不包含5'端帽结构和3'端poly(A)，缺乏游离末端，不易被核酸外切酶降解，比线性RNA 更稳定。目前常用体外转\n录制备环状RNA 的方法主要是通过先体外生成线性RNA，然后通过酶法连接环化、内含子自剪接核酶切割连接环化。宝锐生\n物基于I 型内含子自剪接的成环方式开发出一种操作简单制备环状RNA 的试剂盒，环状RNA 制备试剂盒进行环化的原理是，\n在GTP 和Mg\n2+存在的条件下，环状RNA 前体分子能通过双酯交换反应实现自动环化，本试剂盒将体外转录与成环两步合并\n在一步中进行，使用热稳定的T7 RNA 聚合酶，搭配优化后的反应缓冲液，经过体外转录即可获得环状RNA，无需进行额外\n的成环反应。本试剂盒提供的环化反应体系可以按照比例放大反应体系，对环状RNA 产物的得率无显著影响。\n试剂盒组分\n组分\n货号\n体积\nATP Solution（100mM）\nBP-AS-01\n100μL\nGTP Solution（100mM）\nBP-AS-02\n100μL\nCTP Solution（100mM）\nBP-AS-03\n100μL\nUTP Solution（100mM）\nBP-AS-04\n100μL\nThermostable T7 RNA 聚合酶\nBP-E14\n100μL\nRNase Inhibitor（40U/μL）\nBP-E02\n100μL\n无机焦磷酸酶（0.1U/μL）\nBP-E03\n100μL\n10×Thermostable T7 transcription buffer\nBP-AS-25\n100μL\nDNase I（2U/μL）\nBP-E04\n100μL\nPrecipitation Reagent\nBP-AS-10\n1mL\nRNase R（20U/μL）\nBP-E08\n50μL\n10 × RNase R Buffer\nBP-AS-14\n1mL\nRNase R Dilution Buffer\nBP-AS-15\n1mL\nRNase-free ddH2O\nBP-AS-11\n1mL\nControl Template（circGFP）\nBP-AS-33\n5μL\n保存条件\n-20±5℃存储。\n自备材料\n耗材：无核酸酶PCR 管、无核酸酶移液枪头、RNA 纯化回收磁珠（如有必要）等。\n模板：带T7 启动子的质粒模板、PCR 产物模板。\n试剂：无水乙醇。\n实验流程\n1. 模板制备\n1.1 质粒线性化\n质粒DNA 必须在目的基因下游用限制性内切酶线性化才能被转录。即使只存在少量的环形质粒也会产生非常长的异质性RNA\n转录本，通常需要在凝胶上检查线性化后回收的模板DNA 是否被完全切割。\n1.2 线性化产物回收\n按照以下条件结束线性化过程：\n",
  "CircRNA 合成试剂盒（一步法）\n2025V02\n货号：BP-17-50\n1/20 体积0.5M EDTA、1/10 体积3M 醋酸钠或5M 醋酸铵、2 倍体积无水乙醇，混合均匀，在-20℃沉淀1h，也可过夜沉淀，\n随后在离心机中以大于12000rpm 的转速将DNA 离心15min；去上清，70%乙醇洗沉淀后在离心机中以大于12000rpm 的\n转速将DNA 离心10min；去上清，再次离心5-10s，然后用10μL 的移液枪小心地清除残留液体。在洁净工作台中尽可能吹\n干残留液体，使乙醇完全挥发，避免对下游酶活性产生抑制作用。最后使用RNase-free ddH2O 溶解沉淀，建议控制浓度约\n为1μg/μL。\n2. 体外转录反应\n2.1 采用Thermostable T7 RNA 聚合酶进行体外合成，合成条件为1μg 线性DNA 模板，50℃反应1 小时转录生产RNA。\n根据所需RNA 的量，设置多个反应或放大反应体系，即可大规模合成RNA。具体过程如下：\n（1）取出Thermostable T7 RNA 聚合酶、RNase Inhibitor 和无机焦磷酸酶立即放置在冰上；取出ATP Solution、GTP\nSolution、CTP Solution、UTP Solution 室温下解冻之后立即转移至冰上；取出10×Transcription Buffer 放置在室温下\n解冻，在室温条件下配制转录反应，RNA 体外合成体系以20μL 计，包括以下组分：\n试剂\n体积\n10×Thermostable T7 transcription buffer\n2μL\nATP Solution（100mM）\n1μL\nCTP Solution（100mM）\n1μL\nGTP Solution（100mM）\n1μL\nUTP Solution（100mM）\n1μL\n无机焦磷酸酶（0.1U/μL）\n1μL\nRNase Inhibitor（40U/μL）\n1μL\nThermostable T7 RNA 聚合酶\n2μL\nTemplate DNA\n1μg\nRNase-free ddH2O\nUp to 20μL\n（2）混匀：轻轻拨动试管或用移液枪将混合物上下吹打，瞬离收集反应混合物至试管底部。\n（3）转录：使用带热盖的设备，50℃反应1h。\n（4）消化模板DNA：在转录完成后的体系中加入2μL 的DNase I 去除DNA 模板，反应条件为37℃孵育15min。\n2.2 IVT 产物纯化\n转录产物可采用柱纯化、酚/氯仿抽提纯化法、磁珠纯化或氯化锂纯化。\n3. RNase R 富集环状RNA\nRNase R 消化反应体系如下，RNase R 在加样时可以用RNase R Dilution Buffer 稀释至所需浓度。推荐的反应体系可进行\n等比例扩大，以20μL 计，具体如下：\n试剂\n体积\nRNA\n1μg\nRNase R\n1-4U\n10 RNase R Buffer\n2μL\nRNase-free ddH2O\nUp to 20μL\n4. RNase R 处理后的环状RNA 产物纯化：\n本试剂盒提供氯化锂沉淀法纯化RNA，具体过程如下：\n",
  "CircRNA 合成试剂盒（一步法）\n2025V02\n货号：BP-17-50\n（1）向反应混合物中，加入等体积RNase free H2O 和Precipitation Reagent。\n（2）混合均匀后，置于-20℃放置1 h，以15000rpm，4℃离心15min，收集沉淀。\n（3）小心地移除上清，用500 μL 70%乙醇清洗沉淀，4℃，15000rpm 离心15min。\n（4）完全吸净70%的乙醇，在洁净工作台中尽可能吹干残留液体，使乙醇完全挥发。根据下游实验的需要，将RNA 溶解在\n对应的溶液或缓冲液中。\n注意事项\n1. 体外转录的反应对RNase 高度敏感，反应体系须严格注意不要混入RNase，实验器材如移液枪头，EP 管严格使用\nRNase-free 用品。体系的配制尽可能在无酶环境中配制，可使用清洁后的洁净工作台进行此操作，合成的RNA 也尽可能避\n免在洁净工作台以外的区域开盖，以避免RNase 的污染。\n2. 转录体系配制时请严格按照说明书中的加样顺序进行加样，10×Transcription Buffer 需要在恢复至室温后使用，DNA 在\n低温下容易与亚精胺发生共沉淀，影响转录产量，体系配制过程中，DNA 模板应当是最后加入的组分。\n3. RNase R 活性的发挥需要0.1-1.0mM 的Mg\n2+。\n4. 随底物RNA 的增加，可适当增加RNase R 用量或延长消化时间。\n5. RNA 样本中EDTA 含量可能会影响RNase R 的活性。\n6. 有些circRNA 或套索结构RNA 在经长时间RNase R 消化会导致丰度降低，可能是因为其耐受RNase R 消化能力弱，可尝\n试减少RNase R 用量或缩短消化时间。\n7. 使用前应混匀，避免反复冻融。\n"
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 "官网品名": "CircRNA合成试剂盒（⼀步法）【环状RNA合成与纯化 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/87242",
 "说明书URL": "https://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/07/c9f5b6427de67bf1c68deff76359599d339411e1.pdf",
 "说明书文件名": "BP-17-50 说明书",
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