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 "逐页文本": [
  "CircRNA 合成试剂盒\n2025V02\n货号：BP-13-50\n产品概述\n环状RNA（Circular RNA，circRNA）是一种通过典型的５'-3'磷酸二酯键形成的环形结构的RNA 分子。相比于线性RNA，\ncircRNA 不包含5'端帽结构和3'端poly(A)，缺乏游离末端，不易被核酸外切酶降解，比线性RNA 更稳定。目前常用体外转\n录制备环状RNA 的方法主要是通过先体外生成线性RNA，然后通过酶法连接环化、内含子自剪切核酶切割连接环化。宝锐生\n物基于I 型内含子自剪接的成环方式开发出一种操作简单制备环状RNA 的试剂盒，环状RNA 制备试剂盒进行环化的原理是，\n在GTP 和Mg\n2+存在的条件下，环状RNA 前体分子能通过双酯交换反应实现自动环化，本试剂盒操作仅需一步孵育即可完成，\n因此环化产物不需要进行纯化，可直接用于后续实验。本试剂盒提供的环化反应体系可以按照比例放大反应体系，对环状RNA\n产物的得率无显著影响。\n试剂盒组分\n组分\n货号\n体积\nATP Solution（100mM）\nBP-AS-01\n100μL\nGTP Solution（100mM）\nBP-AS-02\n200μL\nCTP Solution（100mM）\nBP-AS-03\n100μL\nUTP Solution（100mM）\nBP-AS-04\n100μL\nT7 RNA 聚合酶\nBP-E01\n100μL\nRNase Inhibitor（40U/μL）\nBP-E02\n100μL\n无机焦磷酸酶（0.1U/μL）\nBP-E03\n100μL\n10 × Transcription Buffer\nBP-AS-08\n100μL\nPrecipitation Reagent\nBP-AS-10\n1mL\nDNase I（2U/μL）\nBP-E04\n50μL\n10×DNase I Reaction Buffer\nBP-AS-13\n100μL\nRNase-free ddH2O\nBP-AS-11\n1mL\n10 × Circular Buffer\nBP-AS-30\n1mL\nRNase R（20U/μL）\nBP-E08\n50μL\n10 × RNase R Buffer\nBP-AS-14\n1mL\nRNase R Dilution Buffer\nBP-AS-15\n1mL\n保存条件\n-20±5℃存储。\n自备材料\n耗材：无核酸酶PCR 管、无核酸酶移液枪头、RNA 纯化回收磁珠（如有必要）等。\n模板：带T7 启动子的质粒模板、PCR 产物模板。\n试剂：无水乙醇。\n实验流程\n1. 模板制备\n1.1 质粒线性化\n质粒DNA 必须在目的基因下游用限制性内切酶线性化才能被转录。即使只存在少量的环形质粒也会产生非常长的异质性RNA\n转录本，通常需要在凝胶上检查线性化后回收的模板DNA 是否被完全切割。\n1.2 线性化产物回收\n",
  "CircRNA 合成试剂盒\n2025V02\n货号：BP-13-50\n按照以下条件结束线性化过程：\n1/20 体积0.5M EDTA、1/10 体积3M 醋酸钠或5M 醋酸铵、2 倍体积无水乙醇，混合均匀，在-20℃沉淀1h，也可过夜沉淀，\n随后在离心机中以大于12000rpm 的转速将DNA 离心15min。去上清，再次离心5-10s，然后用10μL 的移液枪小心地清除\n残留液体。在洁净工作台中尽可能吹干残留液体，使乙醇完全挥发，避免对下游酶活性产生抑制作用。最后使用RNase-free\nddH2O 溶解沉淀，建议控制浓度约为1μg/μL。\n2. 体外线性RNA 的合成\n2.1 采用T7 RNA 聚合酶进行体外合成，合成条件为1μg 线性DNA 模板，37℃反应2 小时转录生产RNA。根据所需RNA\n的量，设置多个反应或增加反应体系，即可大规模合成线性RNA。具体过程如下：\n（1）取出T7 RNA 聚合酶、RNase Inhibitor 和无机焦磷酸酶立即放置在冰上；取出ATP Solution、GTP Solution、CTP\nSolution、UTP Solution 室温下解冻之后立即转移至冰上；涡旋10×Transcription Buffer，直到完全溶解，一旦解冻，放\n置在室温下，并在室温条件下配制转录反应，RNA 体外合成体系以20μL 计，包括以下组分：\n试剂\n体积\n10 × Transcription Buffer\n2μL\nATP Solution（100mM）\n2μL\nCTP Solution（100mM）\n2μL\nGTP Solution（100mM）\n2μL\nUTP Solution（100mM）\n2μL\n无机焦磷酸酶\n1μL\nRNase Inhibitor\n1μL\nT7 RNA 聚合酶\n2μL\nTemplate DNA\n1μg\nRNase-free ddH2O\nUp to 20μL\n（2）混匀：轻轻拨动试管或用移液枪将混合物上下吹打，瞬离收集反应混合物至试管底部。\n（3）转录：使用带热盖的设备，37℃至少反应2h，对于小片段的RNA（≤300bp）体外转录，为了确保充足的产量，建议\n延长体外转录的时间至3h。在一定范围（16h）内延长体外转录的时间，并不会对产物的质量产生影响。\n（4）消化模板DNA：在转录完成后的体系中加入1μL 的DNase I 和2μL 的10×DNase I Reaction Buffer 去除DNA 模板，\n反应条件为37℃孵育15min。\n2.2 线性mRNA 纯化\n转录产物可采用柱纯化、酚/氯仿抽提纯化法、磁珠纯化或氯化锂纯化。\n3. 体外环状RNA 的合成\n将体外合成的线性RNA 加热到70℃反应5min 后，立即将RNA 放置于冰上静置3min，以解除RNA 的多级结构。然后将\nRNA 加入到环化反应体系，55℃环化反应15min 即可得到环状RNA。\n试剂\n体积\n线性前体RNA\n50μg\nGTP Solution（100mM）\n2μL\n10 × Circular Buffer\n10μL\nRNase-free ddH2O\nUp to 100μL\n",
  "CircRNA 合成试剂盒\n2025V02\n货号：BP-13-50\n4. RNase R 富集环状RNA（成环反应后获得的RNA 包括大部分环状RNA 及少数未被环化的线性前体RNA）：\n4.1 RNase R 酶量筛选预实验\nRNase R 通过消化残留的线性前体RNA 来富集环状RNA。RNase R 在消化线性前体RNA 的反应体系时可参考如下表格：\n试剂\n体积\n线性前体RNA\n1μg\nRNase R\n1-4U\n10 RNase R Buffer\n2μL\nRNase-free ddH2O\nUp to 20μL\n37℃消化约15-30min，进行不同梯度酶量预实验，筛选出合适的酶量（即在完全消化线性前体RNA 同时最大程度保留环状\nRNA 的酶量，此步可根据电泳结果筛选），RNase R 在加样时可以用RNase R Dilution Buffer 稀释至所需浓度。\n4.2 根据预实验筛选的最佳酶量，可进行后续放大实验。\n5. RNase R 处理后的环状RNA 产物纯化：\n本试剂盒提供氯化锂沉淀法纯化RNA，具体过程如下：\n（1）向反应混合物中，加入等体积RNase free H2O 和Precipitation Reagent。\n（2）混合均匀后，置于-20℃放置1 h，以15000rpm，4℃离心15min，收集沉淀。\n（3）小心地移除上清，用500 μL 70%乙醇清洗沉淀，4℃，15000rpm 离心15min。\n（4）小心地去除70%的乙醇，根据下游实验的需要，将RNA 重新悬浮在对应的溶液或缓冲液中。\n注意事项\n1. 体外转录的反应对RNase 高度敏感，反应体系须严格注意不要混入RNase，实验器材如移液枪头，EP 管严格使用\nRNase-free 用品。体系的配制尽可能在无酶环境中配制，可使用清洁后的洁净工作台进行此操作，合成的RNA 也尽可能避免\n在洁净工作台以外的区域开盖，以避免RNase 的污染。\n2. 转录体系配制时请严格按照说明书中的加样顺序进行加样，10×Transcription Buffer 需要在恢复至室温后使用，DNA 在\n低温下容易与亚精胺发生共沉淀，影响转录产量，体系配制过程中，DNA 模板应当是最后加入的组分。\n3. RNase R 活性的发挥需要0.1-1.0mM 的Mg\n2+。\n4. 随底物RNA 的增加，可适当延长RNase R 消化时间和增加酶量。\n5. RNA 样本中EDTA 含量可能会影响RNase R 的活性。\n6. 有些circRNA 或套索结构RNA 在经长时间RNase R 消化会导致丰度降低，可能是因为其耐受RNase R 消化能力弱，可尝\n试减少RNase R 用量或缩短消化时间。\n7. 使用前应混匀，避免反复冻融。\n"
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 "官网品名": "CircRNA合成试剂盒【环状RNA合成与纯化 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/44750",
 "说明书URL": "https://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/07/36f7dd493d3774c96a259bc01665c0e996b88f05.pdf",
 "说明书文件名": "BP-13-50 说明书",
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