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  "货号：BP-12-10\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒2.0\n2025V02\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒2.0\nPre-treatment kit for mRNA capping rate detection\n10T\n产品货号：BP-12-10\n",
  "货号：BP-12-03\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒2.0\n2025V02\n目录\n产品概述\n1. 产品描述............................................................................................................................ 2\n2. 试剂盒组分........................................................................................................................ 2\n3. 自备材料............................................................................................................................ 2\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒操作流程\n1. 探针设计与合成................................................................................................................ 2\n2. 酶切.................................................................................................................................... 3\n3. SDS-PAGE 酶切验证（选做）.......................................................................................... 3\n4. 回收.................................................................................................................................... 3\n5. SDS-PAGE 酶切验证........................................................................................................ 4\n注意事项................................................................................................................................. 4\n技术与支持............................................................................................................................. 4\n第1 页\n",
  "货号：BP-12-10\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒2.0\n2025V02\n产品概述\n加帽率是mRNA 疫苗药物的重要质量属性指标，是mRNA 类产品申报所必需的验证资料。目前，加帽率的测定主要通过液\n质联用的方式进行。具有帽子结构的mRNA 与未加帽的mRNA 其分子量之间存在百数量级的差异，相比于完整mRNA 数十\n万级的分子量，很难精确分析加帽与未加帽样品之间的差异。因此，对加帽率的分析首先需要将长片段的mRNA 处理成小片\n段，将数十万中找百数量级的差异转变为数千中找百数量级的差异。宝锐生物开发的mRNA 加帽率检测前处理试剂盒能精确、\n高效的处理mRNA 样品，处理后的样品可直接用于液质联用的分析，助力快速分析样品加帽率。本试剂盒适用于不同加帽方\n式和具有各类帽子结构的mRNA 样品前处理。\n试剂盒组分\n试剂名称\n体积\n吸附磁珠\n1mL\nMReagent 2.0\n40μL\n10×M Buffer 2.0\n200μL\nLoadingBuffer\n200μL\nBuffer 1\n1mL\nBuffer 2\n18mL\nBuffer3\n1mL*2\nEB Buffer\n1mL\n注意：M Reagent 2.0、10×M buffer 2.0、Buffer 1 于-20±5℃保存；其余成分存放于2-8℃。磁珠切勿冻融。\n自备材料\n必备：\n耗材：200μL PCR 管、1.5mL 无核酸酶离心管。\n试剂：无核酸酶水、探针。\n选备：\n试剂：亚甲基蓝、醋酸钠、10×TBE缓冲液、45%Acr(43.4g丙烯酰胺加1.6g双丙烯酰胺,超纯水定容至100mL，过滤后4℃\n避光保存)、尿素、四甲基乙二胺（TEMED）、10%过硫酸铵（AP）。\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒操作流程\n操作说明\n1. 探针设计与合成\n本试剂盒不提供特异性探针，需要根据目的序列设计探针。设计的探针须包含三部分（如图所示）：3 '端20-25 个与目标序\n列5 '端互补配对的核糖核苷酸序列，为避免探针的降解，此区域序列可使用修饰的核糖核苷酸，推荐使用2 号位甲氧基修饰\n的核苷酸；随后是1 个与目标序列互补配对的脱氧核糖核苷酸序列，此区域无需修饰；最后的3 '端选择Biotin 修饰。单次探\n针合成1OD 即可满足本试剂盒规定次数所需探针量。探针合成推荐的供应商请与技术支持联系。\n第2 页\n",
  "货号：BP-12-10\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒2.0\n2025V01\n2. 酶切\n2.1 合成的干粉形式探针，开盖前顺离至管底，在洁净台中，吸取一定量的Buffer1 将探针溶解成100pmol/μL。\n注意：Buffer1 具体用量参考探针合成标签，溶解的探针可分装保存于-80℃。\n2.2 使用200μL 的无核酸酶PCR 管，加入150pmol 的RNA，随后加入150pmol 的探针，用移液枪轻柔地混匀。\n注意：50pmolRNA含量粗算：RNA用量(ng)=0.05nmol×330g/mol×Xnt,X=RNA碱基数。此步骤确保每管总体积小\n于60μL，对于大体积的反应，可使用8连管操作，孵育后合并。\n2.3 PCR 程序设置：95℃, 5min；65℃, 2min；55℃, 2min；40℃, 2min；22℃, 2min。\n2.4 反应结束后，向其中加入4 μL 的M Reagent 2.0和对应的10×M Buffer 2.0，37℃孵育2h。\n3. SDS-PAGE 酶切验证（选做）\n3.1 试剂配制\n3.1.1 染色液配制：2g/L 亚甲基蓝+0.4M 醋酸钠（醋酸钠pH=4.7）。\n注意：染色液可多次（大于10 次）重复使用，操作过程中注意亚甲基蓝微毒性。\n3.1.2 按照如下的配方配制21% Urea-PAGE 凝胶。\n试剂名称\n体积/质量\n45%Acr\n10 mL\n尿素\n9.60 g\n10×TBE\n2 mL\n10%AP\n140 μL\nTEMED\n14 μL\n注意：此配方适用于1/2 胶，请根据具体实验放大或缩小比例。\n3.2 样品处理\n对照组：4.5μL 无核酸酶水+ 0.5μL 探针+ 5μL Loading Buffer。\n实验组：5μL 酶切处理的样品+ 5μL Loading Buffer。\n混匀的样品70℃, 变性5min，随后立即放置在冰上。\n3.3 电泳\n260V 预电泳26min，上样后260V 电泳2h，染色10min，随后超纯水脱色过夜。\n注意：此阶段样品可暂存于-20℃。\n4. 回收\n4.1 准备磁珠\n磁珠混匀后，取100μL 磁珠加入无核酸酶离心管中，放至磁力架，磁性分离去上清，随后从磁力架取下。\n第3 页\n",
  "货号：BP-12-03\nmRNA 加帽率检测前处理试剂盒2.0\n2023V01\n4.2 磁珠清洗\n管中加入200μL Buffer 2，充分混匀后，磁性分离去上清，重复2 次。\n4.3 上样\n管中加入全部酶切后的样品，充分混匀，必要时，可使用混匀仪室温混匀30min。混匀后，置于磁力架磁性分离去上清，随\n后从磁力架取下。\n4.4 洗杂\n管中加入200μL Buffer 2，磁性分离去上清，清洗磁珠4 次，随后从磁力架取下。\n4.5 二次洗杂\n加入100μL 预冷Buffer 3 混匀，磁性分离去上清，随后从磁力架取下。\n注意：此步骤上清可暂存于-80℃,以避免样品流失。\n4.6 洗脱\n取25μL 预热至80℃的EB Buffer 和磁珠充分混匀，80℃加热4min ，磁性分离保留上清至标记好的无核酸酶离心管中，重\n复此步骤2 次，最后将两次得到的上清混合，再次置于磁力架吸附，确保去除少量残留磁珠。\n注意：制备的样品中若含有磁珠会对检测设备、色谱柱造成伤害，为避免发生此类情况，吸取上清时避免触碰到磁珠，25μL\n以上的样品足够后续的应用。\n5. SDS-PAGE 酶切验证\n为验证本试剂盒对加帽样品的处理效果，保证后续上机测试的结果，使用SDS-PAGE 验证回收的片段，SDS-PAGE 的操作流\n程请参考本章“3 SDS-PAGE 酶切验证”部分。\n注意事项\n1. 按要求保存试剂盒中的组分，M Reagent 2.0、10×M Buffer 2.0和Buffer 1 存放于-20℃, 其余试剂存放于4℃, 注意吸\n附磁珠不能冻融。\n2. 本试剂盒中提供的磁珠、试剂等材料经过了大量筛选验证，为保证处理效果，请勿随意更换试剂盒中提供的材料，否则将\n无法保证实验效果。\n3. 步骤3 为选做步骤，可反应酶切处理的效果，决定后续继续优化酶切条件或进行酶切产物回收，为确保上机测试的效果，\n处理完成样品应当经过SDS-PAGE 检测。\n4. 本试剂盒处理后的样品应当及时上机测试，样品存放时间尽可能小于1 周，未加帽的样品长时间存放易降解，可能会导致\n测试的加帽率与实际偏高。\n5. 实验过程中注意个人防护。\n6. 使用前应混匀，避免反复冻融。\n技术与支持\n本试剂盒处理后的样品适用于任意机型的液质联用系统，针对不同的系统，分离色谱柱和流动相需要进行验证与筛选。宝锐\n生物的研发团队可以在分离色谱柱和流动相的选择上提供技术支持，助力您快速建立加帽率检测方法。\n技术支持邮箱：heliyuan@biori.com。\n第4 页\n"
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 "官网品名": "mRNA加帽率检测前处理试剂盒 2.0【mRNA质量控制 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/44747",
 "说明书URL": "https://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/07/e384370efab61a30809943b2066cb434397346af.pdf",
 "说明书文件名": "BP-12-10 说明书",
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