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   "原文": "宝锐生物自主研发的T7 高效转录试剂盒针对不同模板、不同核苷酸类型，进行了一系列转录反应体系的优化，用户能通过本"
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   "原文": "2. 体外转录的反应对RNase 高度敏感，反应体系须严格注意不要混入RNase ，实验器材如移液枪头，EP 管严格使用"
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   "原文": "3. 体系配制时请严格按照说明书中的加样顺序进行加样，10×Transcription Buffer 需要在恢复至室温后使用，DNA 在低温"
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   "原文": "3.2 加入2×体积的Precipitation Reagent（-20℃保存），轻轻地用移液枪混匀（请勿离心混匀）。"
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   "原文": "3.5 小心地移除上清，用500μL70%的乙醇清洗沉淀，4℃, 15000rpm 离心15min。"
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 "文中货号": [
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 "逐页文本": [
  "货号：BP-03-50\nT7高效转录试剂盒(含pUTP)\n2025V02\n产品概述\n宝锐生物自主研发的T7 高效转录试剂盒针对不同模板、不同核苷酸类型，进行了一系列转录反应体系的优化，用户能通过本\n试剂盒高效地从DNA 获得大量的RNA 产物。该试剂盒使用识别T7 启动子的RNA 聚合酶，以含有T7 启动子序列的质粒或\n者PCR 产物为模板，以天然核苷酸或修饰的核苷酸为底物，通过短时间的体外转录，能够获得高产的单链RNA。同时，底物\n中添加Cap0 或者Cap1 等帽子结构或帽子结构类似物，可通过本试剂盒转录产生具有帽子结构的完整mRNA。\n本试剂盒推荐使用20μL 的体外转录体系，投入1μg 的质粒模板或同等换算的PCR 产物模板，使用天然或修饰的核苷酸，体\n外转录产量均达到200μg 以上，通过工艺设计与优化，可实现用于克级别RNA 的放大生产。转录合成的RNA 可用于RNA\n性质与结构的分析。不具有帽子结构的单链RNA 容易降解，我们建议针对项目需求进行下游处理，环状RNA 需尽快进行下\n游的成环处理；线性RNA 可通过牛痘病毒加帽系统（宝锐BP-E05）和二氧甲基转移酶（宝锐BP-E06）进行加帽处理；采用\n共转录加帽的mRNA，可直接用于mRNA 功能研究。\n试剂组成\n组分\n货号\n体积\nATP Solution（100mM）\nBP-AS -01\n100μL\nGTP Solution（100mM）\nBP-AS-02\n100μL\nCTP Solution（100mM）\nBP-AS -03\n100μL\npUTP Solution（100mM）\nBP-AS -05\n100μL\nT7 RNA 聚合酶\nBP-E01\n100μL\nRNase Inhibitor（40U/μL）\nBP-E02\n100μL\n无机焦磷酸酶（0.1U/μL）\nBP-E03\n100μL\n10×Transcription Buffer\nBP-AS-08\n100μL\nControl Template+\nBP-AS-09\n5μL\nPrecipitation Reagent\nBP-AS -10\n1mL\nDNase I（2U/μL）\nBP-E04\n50μL\n10×DNase I Reaction Buffer\nBP-AS-13\n100μL\nRNase-free ddH2O\nBP-AS -11\n1mL\n+ 试剂盒中阳性对照品用于验证体外转录反应的正常进行，不可用于下游应用。\n保存条件\n-20±5℃存储。\n自备材料\n耗材：无核酸酶PCR 管、无核酸酶移液枪头、RNA 纯化回收磁珠（如有必要）等。\n模板：带T7 启动子的质粒模板、PCR 产物模板。\n试剂：无水乙醇。\n实验流程\n1. 模板制备\n1.1 质粒模板\n质粒模板需要不受蛋白质和RNA 的污染。大多数商业化制备的工业级别或临床级别质粒在T7 高效转录试剂盒中表现良好。\n1.2 质粒线性化\n质粒DNA 必须在目的基因下游用限制性内切酶线性化才能被转录。即使只存在少量的环形质粒也会产生非常长的异质性RNA\n转录本，通常需要在凝胶上检查线性化后回收的模板DNA 是否被完全切割。\n1.3 线性化产物回收\n按照以下条件结束线性化过程：\n",
  "1/20 体积0.5M EDTA\n1/10 体积3M 醋酸钠或5M 醋酸铵\n2×体积无水乙醇\n混合均匀，在-20℃沉淀1h，也可过夜沉淀，随后在离心机中以大于12000rpm 的转速将DNA 颗粒化15min。去上清，\n再次离心5-10s，然后用10μL 的移液枪小心地清除残留液体。在洁净工作台中尽可能吹干残留液体，使乙醇完全挥发，避免\n对下游酶活性产生抑制作用。最后使用RNase-free ddH2O 溶解沉淀，控制浓度约为1μg/μL。\n2. 体外转录\n2.1 取出T7 RNA Polymerase、RNase Inhibitor、Pyrophosphatase 立即放置在冰上；取出ATP Solution、GTP Solution、\nCTP Solution、pUTP Solution 室温下解冻之后立即转移至冰上；涡旋10×Transcription Buffer，直到完全溶解，一旦解冻\n，放置在室温下，并在室温条件下配制转录反应。\n2.2 按下表依次加入各组分：\n组分\n体积\nRNase-free ddH2O\nUp to 20μL\nATP Solution（100mM）\n2μL\nCTP Solution（100mM）\n2μL\nGTP Solution（100mM）\n2μL\npUTP Solution（100mM）\n2μL\n10×Transcription Buffer\n2μL\nRNase Inhibitor（40U/μL）\n1μL\n无机焦磷酸酶（0.1U/μL）\n1μL\nT7 RNA 聚合酶\n2μL\nTemplate+\n1μg\n2.3 混匀\n轻轻拨动试管或用移液枪将混合物上下吹打，瞬离收集反应混合物至试管底部。\n2.4 转录\n使用带热盖的设备，37℃至少反应2h，对于小片段的RNA (≤300bp）体外转录，为了确保充足的产量，建议延长体外转录\n的时间至3h。在一定范围（16h）内延长体外转录的时间，并不会对产物的质量产生影响。\n2.5 消化模板DNA\n向反应体系中加入1μL 的DNase I 和2μL 10×DNase I Reaction Buffer，37℃继续反应15min，消化DNA 模板。\n2.6 反应终止\n75℃加热20min。\n3. 纯化回收\n3.1 加入2×体积的RNase-free ddH2O（预冷），轻轻地用移液枪混匀（请勿离心混匀）。\n3.2 加入2×体积的Precipitation Reagent（-20℃保存），轻轻地用移液枪混匀（请勿离心混匀）。\n3.3 -20℃放置1h。\n3.4 4℃, 15000rpm 离心20min。\n3.5 小心地移除上清，用500μL70%的乙醇清洗沉淀，4℃, 15000rpm 离心15min。\n3.6 小心地去除70%的乙醇，根据下游实验的需要，将RNA 重新悬浮在对应的溶液或缓冲液中。测定RNA 浓度，-80℃冷冻\n保存。\n注意事项\n1. 使用PCR 产物模板或质粒模板时，都需要保证模板中不含乙醇残留，为此，在溶解DNA 沉淀时，需要开盖使乙醇完全挥\n发，此步骤可在洁净工作台中进行。\n2. 体外转录的反应对RNase 高度敏感，反应体系须严格注意不要混入RNase ，实验器材如移液枪头，EP 管严格使用\nRNase-free 用品。体系的配制尽可能在无酶环境中配制，可使用清洁后的洁净工作台进行此操作，合成的RNA 也尽可能避\n免在洁净工作台以外的区域开盖，以避免RNase 的污染。\n3. 体系配制时请严格按照说明书中的加样顺序进行加样，10×Transcription Buffer 需要在恢复至室温后使用，DNA 在低温\n下容易与亚精胺发生共沉淀，影响转录产量，体系配制过程中，DNA 模板应当是最后加入的组分。\n4. 使用前应混匀，避免反复冻融。\n货号：BP-03-50\nT7高效转录试剂盒(含pUTP)\n2025V02\n"
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 "官网品名": "T7 高效转录试剂盒【环状RNA合成与纯化 】",
 "详情页": "https://www.biori.com/product/44620",
 "说明书URL": "https://qipeima.oss-cn-shenzhen.aliyuncs.com/uploads/qipeima/299/05aa6382/25/07/16a702b61961175defb59060410c707448cd3d44.pdf",
 "说明书文件名": "BP-03-50 说明书",
 "PDF字节": 278976
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