厦门艾德生物 · 拜访记录
2026-10-27 ｜ 技术、原料与产品方向沟通 ｜ 内部记录
记录范围：产品方向与协同、血液直扩 ARMS 指标、多重/熔解曲线、酶学与修饰、质控与效期、反应体系与样本、竞品对标、客户提出的资料与审核要求。文中“待确认”为现场未展开或表述需复核的点，附录保留原始记录。
10 copies/µL血液直扩 ARMS 检测限10 µL 加样 = 100 copies/反应
6 靶标一管多重（熔解曲线）Tm 5（待确认）
30–40 µL总体系模板 10 µL＜1/4
37℃ 14 天加速稳定性Ct 滞后≤1.5
3 年客户要求酶效期现为 2 年
02产品方向与协同
| 议题 | 现场记录 | 状态 |
|---|
| 宝锐的业务结构 | 宝锐做原料，主要偏病原方向的酶；伴随肿瘤领域薄弱。 | 已说明 |
| 向客户请教 | 伴随肿瘤领域有哪些地方可以重点关注；产品方向上如何协同。 | 客户建议直接与研发对接 |
| 对接人 | 江风阁（研发总监）、陈曦（原料筛选负责人）——客户建议“直接叫人下来了解”。 | 待安排 |
| 客户产品形态 | 血液直扩 ARMS、多重熔解曲线、FFPE 片段化样本；不做冻干，冰袋运输。 | 已了解 |
03技术需求与指标
ARMS 与血液直扩
| 指标 | 现场记录 | 备注 |
|---|
| 血液直扩 ARMS 检测限 | 10 copies/µL；体系加样 10 µL，即 100 copies/反应；总体系 40 µL | 客户口径（已确认） |
| 是否需要预混液 | 不需要预混；对标 Takara Ex Taq | 单酶方向 |
| ARMS 单酶 / SNP 评测体系 | 客户询问：有没有 ARMS 单酶、SNP 评测体系，能达到什么水平 | 待宝锐提供数据 |
| 特异性 | 野生型与突变型能否稳定区分；不同丰度下扩增是否均衡 | 待验证 |
多重、熔解曲线、快速
| 项目 | 现场记录 | 备注 |
|---|
| 多重靶标数 | 一管 6 靶标，熔解曲线法；Tm 5 | Tm 5 含义待确认 |
| 需求方向 | 冻干、多重、快速 | 客户提出 |
| 熔解曲线法 | 客户询问：有什么特色、灵敏度性能如何 | 待宝锐说明 |
| 不对称 PCR | 主要用于病原，比例 10:1；客户认为 10:1 可以，6:4 这种不算高 | 已确认 |
灵敏度与样本
| 项目 | 现场记录 | 备注 |
|---|
| 灵敏度 | 1,000 copies/mL | 客户口径 |
| 突变检测 | 突变 10 copies/µL，背景几十 ng；野生/突变 1% 或更小 | 待确认是 1% 丰度 |
| 样本类型 | 肿瘤 FFPE 使用片段化模板（160 bp）；不要使用质粒、基因组；160 bp 是对酶的要求 | 已确认 |
| 临床样本量 | 提取处理 30–100 µL，可能没机会做副孔 | 客户说明 |
04酶学、修饰与质控
酶活与质控方法
| 项目 | 现场记录 | 备注 |
|---|
| 酶活测定 | Takara 用同位素示踪标记；艾德测荧光信号，用比活（与 2017 年国标类似） | 方法学差异 |
| 质控项目 | 除酶活、背景核酸外，还包括理化指标 | 客户要求 |
| 核酸残留 | 对供应商来料要求：16S/18S 检测体系、过柱、全能核酸酶 | 客户要求 |
| 效期 | 宝锐现为 2 年；客户要求至少 3 年；其产品需 14 个月，可能只用一次；法规要求供应商写实际效期 | 客户明确 |
| 加速稳定性 | 产品不做冻干，冰袋运输；37℃ 14 天，Ct 滞后 ≤1.5（UNG、RT 酶） | 客户要求 |
| 供应商审核 | 对供应商要求高，需现场审核 | 客户明确 |
修饰与代次
| 项目 | 现场记录 | 备注 |
|---|
| 修饰类型 | 抗体、适配体修饰酶；E10 对标罗氏 cobas（适配体） | 我方介绍 |
| Taq 活性与 5′→3′ 外切 | 切割探针、抗体；封闭用双抗，封闭残留检测不出 | 我方介绍 |
| 化学修饰 | E03：10–15 分钟热激活，常温绝对封闭；95℃ 10 min 只释放 30% 活性 | 我方介绍 |
| 代次 | 三代酶 10–15 分钟完成 40 循环；一代酶 40–50 分钟完成 40 循环 | 客户关注 |
| 耐抑制 | 三代酶对醇类、血液来源抑制物的耐受显著强于一代酶；通过酶改造实现 | 我方介绍 |
| RT 酶 | 低拷贝扩增效率差；诺唯赞 RT 单酶；加修饰后酶活下降，需确定释放温度 | 客户关注 |
| 适配体 | 适配体是 DNA，自然界完全没有的序列；我司修饰让活性释放温度 40℃ | 我方介绍 |
| 差异化 | 国内酶多为双修饰、三修饰，较雷同；客户询问是否有更独特的技术 | 客户提问 |
05反应体系、样本与判读
| 项目 | 现场记录 | 备注 |
|---|
| 总体系 | 30–40 µL，模板 10 µL（＜1/4）；一个样本检测很多管（不同靶标） | 客户体系 |
| RT / Taq 配比 | 按 U 数 200:1 或更高；Taq 1 U/T，RT 100 U/T | 客户口径 |
| 逆转录条件 | 42℃ 5 分钟；客户本周要活性数据 | 待发数据 |
| 反应程序 | 记录一：15 + 30，共 45 循环；记录二：15 个预循环 + 26 循环，40 循环之前判阳 | 两处不一致，待确认 |
| 判读 | 看荧光曲线与 Ct；ΔCt 越大越好（原话“得她 CT 越大越好”，待确认） | 待确认是否 ΔCt |
| 野生型/突变型 | 两者都会起线；存在“野生型检测突变型、突变型检测野生型”的 SNP 样本 | 客户描述 |
| Buffer | 样本片段化 160 bp，buffer 用自己的体系；涉及 Tris、HEPES、磷酸盐（PBS）；离子：钾、镁、铵 | 客户体系 |
| 离子耐受 | 现场记录：我司酶耐钾 50–130。历史记录：客户体系钾离子 42 mM、建议 40–70 mM，单位支持 mM；50–130 上限暂无直接实测记录 | 单位按 mM；上限待补 |
| 镁离子 | 可能用到 3–7 mM | 客户口径 |
| 是否需要突变外切活性 | 要，主要用探针；不对称 PCR 多用于病原 | 客户明确 |
06竞品与对标
| 对象 | 现场记录 | 备注 |
|---|
| Takara | 客户现用 Ex Taq 方向；用同位素示踪测酶活；客户问是否与 Takara 酶做过对比 | 需补对比数据 |
| 诺唯赞 | 对标诺唯赞预混液；诺唯赞 RT 单酶 | 客户提及 |
| 罗氏 cobas | E10 对标罗氏 cobas（适配体修饰） | 我方介绍 |
| 多基因多联检 | 客户自己调 buffer | 客户能力 |
| 性能优势 | 客户问：酶与其他厂家比，性能上的优势是什么 | 待宝锐提供对比 |
07客户提出的资料与审核要求
- RT 酶 42℃ 5 分钟活性数据：本周发给客户。
- 与 Takara Ex Taq 的对比数据：客户询问是否做过。
- 与诺唯赞预混液/RT 单酶的对比：客户提及对标。
- ARMS 单酶、SNP 评测体系与实际水平：客户询问。
- 酶效期 3 年、37℃ 14 天加速、Ct 滞后≤1.5：客户要求。
- 核酸残留控制文件：16S/18S 检测体系、过柱、全能核酸酶。
- 理化指标与批间一致性：除酶活、背景核酸外的质控项。
- 现场审核：客户对供应商要求高，需安排审厂。
08待办清单
| # | 事项 | 负责人 | 时间 | 状态 |
|---|
| 1 | 发 RT 酶 42℃ 5 min 活性数据给客户 | 宝锐 刘新元/研发 | 本周（10-31 前） | 待办 |
| 2 | 整理与 Takara Ex Taq 的对比数据 | 宝锐研发 | 待定 | 待办 |
| 3 | 整理与诺唯赞 RT 单酶/预混液的对比 | 宝锐研发 | 待定 | 待办 |
| 4 | 提供 ARMS 单酶、SNP 评测体系与数据 | 宝锐研发 | 待定 | 待办 |
| 5 | 提供效期、37℃ 14 天加速、核酸残留、理化指标资料 | 宝锐质量/研发 | 待定 | 待办 |
| 6 | 安排客户现场审核 | 宝锐/艾德 | 待定 | 待办 |
09已确认与待补
| 事项 | 结论 | 状态 |
|---|
| ΔCt 表述 | 原话“得她 CT 越大越好”，确认指 ΔCt 越大越好 | 已确认 |
| 片段化 160 bp | 对酶的要求（肿瘤 FFPE 片段化模板） | 已确认 |
| 不对称 PCR 10:1 | 客户认为 10:1 可以；6:4 这种不算高 | 已确认 |
| ARMS 检测限单位 | copies/µL；做到 10 copies/µL；10 µL 加样 = 100 copies/反应；40 µL 体系 | 已确认 |
| 钾离子耐受 50–130 的单位 | 历史记录：客户体系钾离子 42 mM、建议 40–70 mM，单位为 mM；50–130 上限暂无直接实测记录 | 部分确认 |
姓名用字、Tm 5 含义、循环数三处按你的要求不再追查，正文保留现场原记录。
附录现场原始记录（未整理）
10.27厦门艾德---许老师，姜老师研发总监、陈老师项目经理
伴随肿瘤领域薄弱。请教有什么地方可以重点关注？产品方向上的协同？
我们做原料，主要偏病原方向的酶。直接叫人下来了解，江风阁（研发总监），陈曦（原料筛选负责人）。
血液直扩ARMS 检测限能达到多少？3000-10000拷贝/mL IU/mL
冻干、多重、快速
多重做到几重？熔接曲线法一管6靶标。Tm5
对标takara的extap。不需要预混。
有没有ARMS单酶，SNP评测体系，达到什么水平？
如何测酶活？takara同位素示踪标记，我们测荧光信号，比活（与17年国标类似）。
控原料核酸残留：对供应商来料进行要求，16s18s检测体系，过柱，全能核酸酶。
酶效期两年，短了。他们的酶效期至少三年，他们产品需要14个月，可能只能用一次。法规要求供应商写的效期是实际效期。
酶的质控除了酶活、背景核酸质控、理化指标。
产品不做冻干，用冰袋运输，37°C加速时间（UNG，RT酶），要求37°C14天，Ct滞后1.5个Ct之内。
有没有和takara的酶做过对比。对标诺唯赞的预混液
多基因多联检，自己调buffer。
酶与其他厂家比性能上的优势？
抗体、适配体修饰酶，E10对标罗氏cobas（适配体），
Taq活性和5-3外切活性（切割探针、抗体）封闭，双抗，封闭残留检测不出。
化学修饰 E03 10-15分钟热激活，常温下绝对封闭
95°C 10min只释放30%活性。
特异性一代酶最好？
三代酶 10-15min完成40循环
一代酶 40-50min完成40循环
三代酶的耐受情况不一样，显著比一代酶在醇类和血液来源抑制物的耐受能力强。通过酶改造来实现耐抑制。
对供应商要求高、对供应商现场审核
特异性，野生型突变型稳定的区分？
RT酶低拷贝扩增效率差
诺唯赞RT单酶
临床样本，提取处理，30-100ul，可能就没机会做副孔
总体系30-40ul（模板10ul<1/4）体系大，一个样本检测很多管（不同靶标）
逆转录/taq 1:1（按U数-200：1）或更高，
Taq 1U/T,逆转录100U/T 。
如何确定酶适配ARMS技术？
扩增效率和特异性（一代二代更少），野生型，突变型的Ct值能达到多少？
我们客户反馈得塔Ct能做到10。模板量少，区分也要大
低拷贝样本，酶与引物发生反应，对酶处理，对RT酶做封闭处理（适配体）
荧光值更强，Ct值不会很大变动。
适配体是DNA，自然界完全没有的序列。
国内酶都是双修饰、三修饰，很雷同，更独特的技术？
RT酶加修饰后酶活下降，温度？我们修饰让活性释放的温度40度
客户这边：42°C 五分钟。活性数据本周发给客户
逆转录42°C五分钟，结果判读，荧光曲线和CT，得她CT越大越好。
15+30是反应程序，总共45循环
15个预循环+ 26循环，40个循环之前判阳。阳性判读？
野生型和突变型都会起线，
野生型检测突变型，突变型检测野生型
SNP样本。
样本片段化160bp，buffer用自己的体系。酶对buffer是否适配？
tris、haipasi、磷酸盐（PBS）
钾离子、镁离子、氨根离子
我们酶能耐受钾离子50-130。
熔接曲线法有什么特色？灵敏度的性能？
要不要突变外切活性？要，主要用探针，不对称用在病原上比较多，10:1（客户说很低？）
灵敏度：1000拷贝/mL
突变10拷贝/ul，背景几十纳克，野生和突变1% 或更小。
我们的数据更偏向病原。没有冻干和快速的需求。
稳定性、特异性、效率，拒绝假阳、漏检。镁离子可能用到3-7mM。
不同样本丰度下的扩增均衡。
肿瘤样本FFPE使用片段化模板。不要使用质粒、基因组。
附录保留现场原始措辞。原始记录中的“3000-10000 拷贝/mL IU/mL”已由客户更正为 10 copies/µL（10 µL 加样 = 100 copies/反应，40 µL 体系），以正文为准。
